1. Медицинская микробиология, ее цели и задачи, отношение к другим медицинским наукам. Роль медицинской микробиологии в создании профилактического направления в здравоохранении. Микробиология —
жүктеу/скачать 0,95 Mb.
|
Otvety po mikrobiologii-1
- Бұл бет үшін навигация:
- 88. Возбудитель столбняка: биологическая характеристика, факторы патогенности. Эпидемиология, патогенез, диагностика, профилактика и лечение столбняка.
- 91. Возбудитель коклюша: биологические свойства, отличительные особенности. Эпидемиология, патогенез, диагностика и профилактика коклюша.
| Культуральные свойства На плотных средах бактерии возбудителя газовой гангрены образуют S- и R-колонии. S-колонии круглые, сочные, куполообразные, с гладкими ровными краями. Сначала они прозрачные, позднее становятся мутными, серовато-белыми. R-колонии неправильной формы, бугристые, с неровными шероховатыми краями; в глубине агара напоминают комочки ваты. На агаре Цейсслера через 12-18 ч образуют гладкие сероватые колонии с ровными краями и плотным возвышением в центре. Колонии окружены зоной гемолиза; гемолиз может быть полным либо частичным. Характерное свойство колоний clostridium perfringens типа А, служащее дифференцирующим признаком, — способность менять серовато-белый цвет на зеленовато-оливковый после кратковременного пребывания в аэробных условиях. На желточном агаре бактерии возбудителя газовой гангрены образуют колонии, окружённые зоной перламутрового преципитата (фосфорилхолин), образующегося из лецитина куриного желтка под действием лецитиназы (рис. 10, см. цветную вклейку). Рост в жидких и полужидких средах. Культуры С. perfnngens типа А имеют характерный запах масляной кислоты. Оптимум рН 7,2-7,4, ко могут расти в интервале 5,0-8,5. На средах, содержащих глюкозу, рост происходит очень бурно с образованием Н, и СО,, и заканчивается через 8-12 ч. Первые признаки роста на среде Китта-Тароцци могут проявляться уже через 1—2 ч (особенно при 43 °С) и проявляются помутнением и появлением пузырьков газа из-под кусочков печени при встряхивании.
Микробиологическая диагностика. Материал( кусочки пораженных тканей, раневое отделяемое) микроскопируют. Клинический диагноз подтверждается при обнаружении грам+ палочек в материале от больного в отсутствие лейкоцитов. Специфическая профилактика. Имеются анатоксины С. Perfringens в составе секстанатоксина. Факторы вирулентности: 1) токсины(главные)-альфа-токсин(лецитиназа), бета-, эпсилон-, энтеротоксин; 2) токсины( минорные)- дельта-, тэта-, каппа-, лямбда-, мю-, нитоксин, нейраминидаза). Профилактика газовой гангрены важный фактор в предотвращении заражения и дальнейшего лечения. Одним из важных факторов является быстрота доставки пациента в медицинское учреждение; Обеспечение больного отдельной палатой, так как инфекция заразна; Максимальное раскрытие пораженного участка для доступа кислорода; Установка дренажа; Введение противостолбнячной и противогангренозной сыворотки; Накладывание рыхлой повязки для предотвращения повторного заражения. Лечение газовой гангрены эффективно лишь при хирургическом вмешательстве. 88. Возбудитель столбняка: биологическая характеристика, факторы патогенности. Эпидемиология, патогенез, диагностика, профилактика и лечение столбняка. Сlostridium tetani облигатный анаэробКлетки С. tetani - крупные прямые, перитрихи, капсулу не образуют. Споры круглые, больше диаметра клетки, расположены терминально. Углеводы не ферментируют, не образуют индола, восстанавливают нитраты, медленно свертывают молоко. Культивируются на среде Китта-Тароцци, сахарном кровяном агаре. Колонии окружены зоной гемолиза. Хемоорганотрофы С. tetani не образуют каталазу и оксидазу, ферментируют глюкозу, лактозу и другие сахара, разжижают желатину. Антигены Содержат видоспецифический О-антиген и типоспецифические Н-антигены, по которым выделяют около 10 сероваров. Антигенная специфичность столбнячного экзотоксина стабильна. Патогенность и патогенез Патогенность С. tetani определяется секрецией сильнодействующих двух белковых токсинов. 1)Тетаноспазмин представляет собой белок, непрочно связанный с клеткой. В питательной среде появляется в результате их аутолиза. Тетаноспазмин - функциональный блокатор, способный соединяться с рецепторами нейронов. Его токсичность объясняется прямым влиянием на процесс передачи нервных импульсов в головном и спинном мозге. 2)Тетанолизин - секретируемый белок, антигенно сходный с Острептолизином и тета-токсином С. perfnngens. Он относится к мембранотоксинам, вызывает гемолиз эритроцитов. Заболевание начинается после прорастания в ране спор возбудителя и продуцирования вегетативными клетками описанных токсинов, которые гематогенным путем разносятся по организму. У человека столбняк протекает по нисходящему типу. Независимо от места проникновения возбудителя в организм первыми симптомами являются тонические сокращения жевательных и мимических мышц, затем тоническое сокращение и спазм мышц затылка и спины. Тело принимает вид дуги. Смерть наступает от асфиксии и поражения жизненно важных нервных центров. Столбняк может наступить после родов, у новорожденных и после операций. У новорожденных столбняк возникает вследствие плохой обработки антисептиками пупочного канатика, у рожениц - при попадании спор через слизистую оболочку матки. Иммунитет После перенесения столбняка иммунитет отсутствует, хотя тетаноспазмин обладает выраженной иммуногенной активностью. Это связано с недостаточным его количеством вследствие быстрого проникновения в нейроны. Возможны повторные заболевания. Экология и эпидемиология Возбудитель столбняка широко распространен в природе. Средой обитания является кишечник животных и человека. С фекалиями он попадает в почву, в которой образуются споры, сохраняющиеся много лет. Заражение наступает только при проникновении спор в организм через раневую поверхность, особенно при создании в них анаэробных условий. Первичная бактериоскопия С патологического или секционного материалов изготавливают несколько мазков и препаратов-отпечатков. окрашивают по Граму, Ожешко (для выявления спор) и микроскопируют в иммерсионной системе. Наличие в мазках длинных грамположительных палочек с круглыми терминальными спорами при соответствующей клинической картине позволяет заподозрить присутствие С. tetani. Но на основании только микроскопического исследования можно сделать вывод, поскольку в материале могут быть сходны по морфологии непатогенные микроорганизмы (С. pseudotetanicum, С. tetanomorpham). Бактериологическое и биологическое исследование Полученный в лаборатории материал растирают в стерильных ступках с песком, добавляя среду для контроля стерильности до получения 10% суспензии. Жидкую фазу материала разделяют на две равные части, одну из которых прогревают при 80 ° С в течение 20 мин. Это приводит к гибели вегетативных клеток бактерий и значительно повышает шансы на выделение С. tetani. Для накопления анаэробных клостридий обе порции высевают в две пробирки со средой Китти-Тароцци (или тиогликолевой бульоном). Одновременно для получения изолированных колоний производят посев на чашку с анаэробным кровяным Посевы в анаэробных условиях при температуре 37 ° С в течение 48-72 час. Колонии С. tetani на кровяном агаре плоские, полупрозрачные, с неровными краями, нередко в виде переплетенных нитей, напоминающие паучков. Вокруг колоний возникает зона гемолиза. Если колонии отсутствуют, делают высев из среды накопления на кровяной агар. При посеве уколом в высокий столбик сахарного агара колонии С. tetani напоминают облака или жмуточкы ваты. Для выявления токсического действия культуры или первичного изучаемого материала ставят биологическую пробу нейтрализации токсина столбнячной сывороткой на животных. Столбнячный токсин получают путем выращивания культуры в среде Китт-Тароцци течение 2-3 суток с последующей фильтрацией или центрифугированием бульона. Двум белым мышам внутримышечно (у корня хвоста) вводят по 0,5 мл смеси фильтрата с столбнячной антитоксической Если в фильтрате содержался столбнячный экзотоксин, зараженные мыши погибают при явлениях восходящего столбняка. Контрольные животные остаются живыми. Аналогично биопробу ставят и с исследуемым материалом (растертые в изотоническом растворе кусочки тканей, гной, экссудат и др.). Возникает такая же клиническая картина столбняка, как и после введения токсина, а Антисыворотка нейтрализует присутствует токсин. Для выявления столбнячного токсина в средах накопления, а также для идентификации выделенной чистой культуры С. tetani используют высокоспецифические и более экономическую реакцию непрямой гемагглютинации. Для идентификации С. tetani в различных объектах можно использовать люминесцентно-серологический метод, применив противостолбнячную антимикробным сыворотку, меченую изотиоцианатом флуоресцеина, а также метод иммуноферментного анализа. Серологический метод диагностики столбняка практически не используется. Только для контроля эффективности вакцинации столбнячным анатоксином (определение уровня антитоксина в крови) выборочно проводят постановку реакции нейтрализации, РНГА, ИФА. Профилактика и лечение Вакцинопрофилактика столбняка проводится путем иммунизации взрослых и детей разными препаратами, в которые входит столбнячный анатоксин (АКДС, АДС - адсорбированная коклюшная вакцина и дифтерийно-столбнячные анатоксины). Для лечения применяется антитоксическая сыворотка и противостолбнячный иммуноглобулин. 89. Грамотрицательные анаэробные микроорганизмы, возбудители гнойно-воспалительных заболеваний (вейонеллы, фузобактерии, бактероиды): биологические свойства, факторы патогенности. Основные принципы лабораторной диагностики. Бактероиды Палочковидные клетки различных размеров. Как правило, неподвижные. Умеренно строгие анаэробы, хемоорганотрофы, метаболизируют углеводы, пептон или промежуточные продукты метаболизма. Размножение стимулируется гемином и витамином К. Не образуют пигменты. Антигены бактероидов отличаются вариабельностью и практически не используются для их идентификации и дифференцировки. Патогенность и патогенез Бактероиды принадлежат к условно-патогенным бактериям. У иммунодефицитных лиц участвуют в возникновении гнойновоспалительных процессов в ассоциациях с аэробными бактериями. Факторами вирулентности являются капсулы, пили, белки наружной мембраны, которые участвуют в адгезии. Капсульный полисахарид как фактор агрессии защищает бактерии от фагоцитоза. Вместе с тем упомянутые виды бактероидов продуцируют ряд ферментов: нейраминидазу, фибринолизин, гепариназу, участвующие в инвазии, а также продукты метаболизма - жирные кислоты с короткой цепью, биогенные амины, нарушающие функциональную активность макрофагов и лейкоцитов. ЛПС участвует в подавлении активности фагоцитирующих клеток. Упомянутые виды бактероидов встречаются при перитонитах, абсцессах брюшной полости, легких и гнойно-воспалительных процессах другой локализации. Бактероиды являются обитателями толстой кишки человека. Диагностика бактероидозив Единственным эффективным методом распознавания заболеваний, вызванных бактероидами, является бактериологический. Принцип взятия и транспортировки исследуемых материалов (кровь, ликвор, гной, мокрота, моча, кал, кусочки пораженных тканей и др.). Такие же, как и при анаэробной газовой инфекции. Следует избегать контакта проб с атмосферным воздухом. Наиболее оптимальным является заключение аспирантов и доставка их в шприцах с удаленным воздухом. После первичной микроскопии материала его сеют на специальные питательные среды (кровяной, сывороточный, тиоиликолевий агар с добавлением экстрактов из мозговой ткани, гемина, витамина К). Культивируют в строгих анаэробных условиях в атмосфере 10% С02при 37 ° С. В мазках, окрашенных по Граму, В. fragilis имеют вид прямых или немного изогнутых грамотрицательных палочек, без спор и капсул, расположенных в одиночку, парами или короткими цепочками из 3-4 клеток. При окраске метиленовым синим часто окрашиваются биполярно. Бактероиды растут медленно (5-7 дней). Колонии В. fragilis мелкие (до 1 мм), немного вогнутые, серовато-белые, без зон гемолиза. В. melaninogenicus на кровяных средах образует гладкие или шероховатые колонии диаметром 1-3 мм черного цвета, иногда с зоной гемолиза вокруг них. Выделенные чистые культуры идентифицируют по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам. Штаммы В. fragilis раскладывают глюкозу, лактозу, сахарозу, не ферментируют рамнозу, не образуют индола, но выделяют сероводород. Ключевые признаки для идентификации вида - рост на среде с 20% желчных солей, резистентность к канамицину (100 мкг), ванкомицину (5 мкг) и колистин (10 мкг), которую определяют методом дисков. Культуры В. melaninogenicus раскладывают глюкозу, лактозу и сахарозу, не ферментируют маннит, гидролизуют крахмал и гликоген. Ключевыми признаками вида являются образование пигмента, отсутствие роста на желчных средах, чувствительность к колистин, устойчивость к ванкомицину и канамицину Монокультуры бактероидов легко выделить при посевах крови и спинномозговой жидкости. При септицемии, тяжелых воспалительных и гангренозных процессах в крови больных быстро и в больших количествах вырабатываются антитела. Это дает возможность провести серологические исследования. Высокие титры антител определяют с помощью реакции агглютинации, преципитации в геле и непрямой гемагглютинации. Фузобактерии (Fusobacterium) — род грамотрицательных палочковидных облигатных анаэробных бактерий; обитают на слизистой оболочке рта и кишечника, бывают неподвижными или подвижными, содержат мощный эндотоксин. Наиболее часто в патологическом материале обнаруживают F. nucleatum и F. necrophorum. Большинство фузобактерии чувствительны к b-лактамным антибиотикам, однако встречаются резистентные к пенициллину штаммы. Фузобактерии, за исключением F. varium, чувствительны к клиндамицину. Диагностика фузобактериозов Гнойные и гангренозные процессы, особенно в полости рта, верхних дыхательных путях и мочеполовых органах могут привести и фузобактерии. Лабораторную диагностику заболеваний проводят с теми же методами, что и при других анаэробных инфекциях. Используют микроскопический, бактериологический и биологический методы. Бактериоскопические исследования проводят при диагностике поражений кожи и слизистых оболочек. Материал для изготовления мазков берут на границе здоровой и пораженной ткани. Для окраски используют метод Грама или Леффлера. При микроскопии Е nucleatum и Е necrophorum выглядят как длинные грамотрицательные бактерии веретенообразной формы с заостренными концами, иногда с гранулами внутри клеток. Они не имеют ни спор, ни капсул. Для бактериологического исследования берут гной из язв или полостей при поражении внутренних органов. Посевы делают на сывороточные и кровяные среды. Асцитическая жидкость, цистеин, экстракт дрожжей и углекислый газ стимулируют рост фузобактерий. Они растут в присутствии генциановый фиолетового и других красителей, которые используют для изготовления селективных сред. На печеночном или сердечно-мозговом бульоне с глюкозой под вазелиновым маслом фузобактерии образуют гранулярный и слизистый осадок и помутнение с характерным запахом сыра. На сывороточном агаре в строго анаэробных условиях они растут в виде маленьких (1-2 мм), круглых, выпуклых, непрозрачных колоний с желтоватым центром. На кровяном агаре вокруг них возникают зоны гемолиза. В случае получения чистых культур их идентифицируют по морфологическим, культуральным и биохимическим признакам. Рост фузобактерий подавляют желчные кислоты, колистин и канамицин, но не ванкомицин. Они образуют большое количество масляной кислоты. Биологический метод чаще используют при работе с сильно загрязненным посторонней микрофлорой материалом, который вводят белым мышам подкожно у корня хвоста. После гибели животных в месте некроза на границе здоровой и пораженной ткани легко обнаруживают возбудителя микроскопически или выделяют его чистую культуру при некротической ангине. Вейонеллы (Veillonella) — род грамотрицательных анаэробных диплококков; располагаются в виде коротких цепочек, неподвижны, спор не образуют. Чувствительны к пенициллину, левомицетину, тетрациклину, полимиксину, эритромицину, резистентны к стрептомицину, неомицину, ванкомицину. Диагностика вейлонелеза Мелкие, грамотрицательные аспорогенных анаэробные кокки (вейлонелы) постоянно находятся в полости рта, дыхательных путях и кишечном тракте как представители фонового микробиоценоза. Самостоятельно они редко вызывают развитие патологических процессов. Чаще в ассоциации с другими патогенными анаэробами и аэробами способны вызывать абсцессы мягких тканей, раневые инфекции и даже септические состояния. При лабораторной диагностике вейлонельозу патологический материал исследуют микроскопически и бактериологически. В мазках, окрашенных по Граму, V. atipica и V. parvula выглядят коккообразные бактерий диаметром 0,3-0,5 мкм, которые располагаются парами, короткими цепочками или хаотическими скоплениями. На молочном агаре в анаэробных условиях основные виды вейлонел образуют непрозрачные, ромбо-или звездообразные колонии размером 1-3 мм. Они не выделяют каталазу, не разлагаются углеводов, не разжижают желатин, не образуют индол, устойчивые к ванкомицину (500 мкг). Выделены несколько сероваров каждого вида, но серологическая идентификация вейлонел в обычных бактериологических лабораториях не проводится. Профилактика и лечение Для лечения используют антибиотики широкого спектра действия. 90. Возбудитель дифтерии: биологические свойства, биотипы, факторы патогенности. Токсигенные и нетоксигенные дифтерийные палочки. Эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика, профилактика и лечение дифтерии. Проба Шика. Они располагаются под углом друг к другу в виде римских пятерок. Зерна волютина выявляются при окраске уксуснокислой синькой по методу Нейссера, которая окрашивает только включения, не затрагивая цитоплазму. Дифтерийная палочка окружена микрокапсулой и имеет пили. С. diphtheriae требовательны к питательному субстрату. Они нуждаются во многих аминокислотах, углеводах, минеральных солях. Обычно их культивируют на свернутой сыворотке крови и на кровяном агаре с теллуритом калия. На последней среде образуют колонии двух типов: gravis - темно-серого цвета и mitis - черного цвета, которые отличаются друг от друга и по биохимическим признакам. Антигены С. diphtheriae содержат в микрокапсуле К-антиген, позволяющий дифференцировать их на серовары и групоспецифический полисахаридный антиген клеточной стенки, который дает перекрестные серологические реакции с микобактериями и нокардиями. Патогенность и патогенез. Факторы вирулентности дифтерийных бактерий - пили и микрокапсула, с помощью которых они прикрепляются к эпителиоцитам миндалин, реже гортани, трахеи, полости носа, конъюнктивы глаза, вульвы. Затем происходит колонизация эпителиоцитов, что сопровождается возникновением воспалительного процесса. Токсичность связана с секрецией гистотоксина, который состоит из двух субъединиц: токсического полипептида и транспортного полипептида, ответственного за доставку токсического компонента к клеткам-«мишеням». Образование первого контролируется бактериальными генами, второго - генами фага, лизогенизировавшего бактериальную клетку. Это свидетельствует о том, что только лизогенные клетки С. diphtheriae могут секретировать гистотоксин. Фиксация гистотоксина происходит на рецепторах мембран мышечных клеток сердца, паренхимы сердца, почек, надпочечников, нервных ганглиев. При этом блокируется синтез белка на рибосомах, что, в конечном итоге, приводит к гибели клеток. При дифтерии, как правило, отсутствует бактериемия и септицемия в связи с локализацией С. diphtheriae в клетках гортани, где развивается фибринозно-некротическое воспаление с образованием пленок, лимфаденита и отеков, что может привести к асфиксии. Кроме дифтерии гортани С. diphtheriae вызывает дифтерию раневых поверхностей и половых органов. К дифтериеподобным коринебактериям относятся следующие: С. xerosis вызывает хронические конъюнктивиты, С. ulcerans - легкие формы дифтериеподобных заболеваний, С. pyogenes и С. haemolyticum - язвенно-некротические фарингиты, тонзиллиты, гингивостоматиты. С. pseudodyphtheriae является постоянным обитателем кожи и слизистых. Иммунитет Напряженность постинфекционного иммунитета при дифтерии обусловлена высоким уровнем антитоксина в сыворотке крови. Образующиеся при дифтерии антибактериальные антитела - агглютинины, преципитины и другие - не обладают протективными свойствами. О наличии или отсутствии антитоксического иммунитета судят по реакции Шика - нейтрализации токсина антитоксином. При введении V40 DLM дифтерийного токсина в кожу предплечья появляется покраснение и припухание в случае отсутствия антитоксина в крови. При наличии антитоксина реакция Шика отрицательная. Экология и эпидемиология Средой обитания для С. diphtheriae являются люди, в зеве которых они локализуются. Главным образом дифтерией болеют дети. Однако за последние 30 лет дифтерия «повзрослела». У взрослых дифтерия протекает тяжело и может закончиться летальным исходом. В окружающей среде бактерии дифтерии сохраняют жизнеспособность в течение нескольких дней, поскольку они переносят высушивание. Заражение происходит воздушно-капельным и реже контактным путем. Взятие и доставка материала в лабораторию Материалом для исследования пленка из миндалин, дужек, неба, язычка, слизь из зева и носа, реже выделения из глаза, уши, раны, влагалища, пораженного участка кожи. По требованию эпидемиолога исследуют смывы с игрушек и других предметов, некоторые пищевые продукты (молоко, мороженое). Материал нужно брать до начала этиотропного лечения натощак или через 2 ч после приема пищи Бактериоскопическое исследование Бактериоскопическое исследование материала от больного проводят только по требованию врача и только для того, чтобы распознать некротическую ангиной Симановского-Плаута-Венсана (выявление веретенообразных палочек и спирохет Венсана, которые при обычных методах культивирования не растут). На протяжении многих лет микроскопическое исследование и выявление зерен волютина, окрашенных по методам Леффлера и Нейссера, было основой лабораторной диагностики дифтерии и выявления бактерионосительства. Теперь, в связи с изменчивостью дифтерийных бактерий под воздействием антибиотиков, первичная микроскопия исследуемого материала не рекомендуется. Бактериоскопическое исследование проводится с целью идентификации нетипичных колоний на кровяно-телуритових средах и при проверке чистоты выделенных культур. Мазки окрашивают по Граму, Леффлером и Нейссером. Можно красить их уксуснокислым метиловым фиолетовым, толуидиновым синим или бентиазоловим и тиазиновых красителей. Дифтерийные палочки в мазках располагаются под углом, в виде латинских букв V, X, Y, или образуют скопления, напоминающие кучку разбросанных спичек. Волютина зерна располагаются, как правило, на полюсах микробных клеток. Псевдодифтерийни бактерии и дифтероиды размещаются параллельно (в виде "частокола") и, конечно, не имеют зерен волютина. Зерна Бабеша-Эрнста можно обнаружить с помощью люминесцентной микроскопии при окраске мазков корифосфином. Зерна приобретают оранжево-красного цвета на фоне желто-зеленых тел бактериальных клеток. Бактериологическое исследование Клинический материал засевают на кровяной агар и кровяно-телуритовий агар (или среду Клауберга II), разлитые в чашки Петри. Посев на кровяной агар необходим для обнаружения и другой микрофлоры. Кроме того, некоторые штаммы Cdiphtheriae чувствительны к действию теллурита калия, поэтому их рост на телуритових средах может подавляться. Для выявления дифтерийного бактерионосительства посевы делают только на кровяно-телуритовий агар, поскольку в посевном материале может содержаться небольшое количество дифтерийных палочек, рост которых на неселективных средах будет подавляться другой микрофлорой. При этом допускается использование и транспортной среды. Специфическая профилактика и лечение Вакцинопрофилактика дифтерии проводится при введении дифтерийного анатоксина, полученного при обработке дифтерийного токсина формалином. В нашей стране для вакцинации используют АКДС - адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину. Антитоксическую сыворотку применяют для специфической терапии, а антибиотики - для санации бактерионосителей. Из антибиотиков используют пенициллин, ванкомицин, эритромицин и др. 91. Возбудитель коклюша: биологические свойства, отличительные особенности. Эпидемиология, патогенез, диагностика и профилактика коклюша. Возбудитель коклюша представляет собой небольшие коккобактерии, располагающиеся поодиночке или попарно. Неподвижны, спор не образуют, имеют капсулу, пили. Грамотрицательны. Хемоорганотрофы, метаболизм только окислительный, строгие аэробы. Возбудитель коклюша не растет на простых питательных средах. В качестве факторов роста необходимы некоторые аминокислоты. Рост на простых питательных средах ингибируется образующимися жирными кислотами. Для их нейтрализации применяют кровь, древесный уголь или ионообменные смолы. Возбудитель культивируется на картофельно-глицериновом агаре с добавлением крови (среда Борде-Жангу), на кровяном агаре и на полусинтетическом казеиново-угольном агаре без добавления крови. Колонии коклюшных бактерий мелкие, круглые, с ровными краями, блестящие, напоминающие капельки ртути или зерна жемчуга. Свежевыделенные культуры образуют S-форму колоний (1 фаза), при дальнейшем культивировании могут образовывать R-формы (2 фаза). На кровяных средах образуют зону гемолиза. В.pertussis ферментативно малоактивна, сахаров не расщепляет, не обладает протеолитической активностью, не восстанавливает нитратов. Антигены Антигенная структура бактерий рода Bordetella довольно сложная. У них выявлено 14 антигенных компонентов, или агглютиногенов. Родовым является агглютиноген 7. Видоспецифический агглютиноген для возбудителя коклюша - агглютиноген 1. Патогенность и патогенез К факторам вирулентности относится способность возбудителя к адгезии за счет пилей на эпителиоцитах респираторного тракта. С пилями связан филаментозный гемагглютинин, склеивающий В. pertussis с другими бактериями с образованием биопленок, состоящих из разных микробов. Образует белковые токсины, прочно связанные с цитоплазмой: трахеальный токсин (функциональный блокатор), вызывающий раздражение нервных рецепторов слизистой оболочки дыхвтельных путей, что приводит к возникновению приступов кашля. Токсинемия приводит к сосудистому спазму мелких бронхов, судорожному подергиванию вследствие его воздействия на дыхательный и сосудистый центры; кроме того, токсин активирует аденилатциклазную систему и накопление цАМФ, что приводит к нарушению водно-солевого обмена; дермонекротоксин, действующий на клетки миокарда за счет АТФ-азной активности. Отмечается гистаминосенсибилизирующее и лейкоцитозстимулирующее действие этих токсинов. Способность В. pertussis к пенетрации в эпителиоциты, где они сохраняются длительное время, а также незавершенный фагоцитоз в результате их выживания в макрофагах. Капсульный полисахарид защищает бактерии от фагоцитоза. Все гены, контролирующие патогенность, содержатся в одном опероне. Токсическое действие возбудителя приводит к раздражению нервных рецепторов слизистой оболочки респираторного тракта, кашлю и возбуждает дыхательный центр, вследствие чего наступает спазм мелких бронхов. Иммунитет При коклюше имеет место гуморальный иммунный ответ, сопровождающийся формированием напряженного гуморального иммунитета. Повторные заболевания не отмечены. Экология и эпидемиология В. bronchiseptica обитает в дыхательных путях собак и других животных. Источником инфекции являются больные дети и бактерионосители. Бордетеллы быстро погибают в воздухе. Заражение происходит воздушно-капельным путем при непосредственном общении с больным ребенком или носителем. Взятие исследуемого материала Слизь с задней стенки глотки берут стерильным ватным тампоном желательно во время приступа кашля с обязательным использованием шпателя. Основными методами лабораторной диагностики коклюша является бактериологический и серологический. Для экспресс-диагностики, особенно в ранний период болезни, используют реакцию иммунофлюоресценции. Для этого мазки из исследуемого материала обрабатывают специальными флуоресцентными сыворотками и исследуют под люминесцентным микроскопом. Рассматривают 50 полей зрения. Положительным результат считают тогда, когда в поле зрения выявляют 2-3 бактериальные клетки, светящиеся. Бактериологическое исследование Для выделения возбудителя используют такие традиционные среды: картофельно-глицериновый агар с кровью кролика (Борде-Жангу), коммерческий селективно-угольный агар (КВА) или молочно-кровяной агар. Для подавления роста грамположительной микрофлоры дыхательных путей к сред рекомендуют добавлять пенициллин. Выращивание проводят при 37 ° С в течение трех-пяти суток. Колонии на среде исследуют под стереоскопическим микроскопом или с помощью лупы. Они мелкие, выпуклые, блестящие, сероватого цвета, напоминающие капли ртути или перламутр. Серологическое исследование Серологическое исследование проводят в основном для ретроспективной диагностики или в тех случаях, когда культура бордетел не выделена. Антитела к возбудителям образуются на третьей неделе болезни и позже. Для их выявления используют реакции агглютинации, связывания комплемента и особенно непрямой гемагглютинации. В связи с массовыми прививками детей против коклюша, все серологические реакции необходимо ставить методом парных сывороток. Диагноз подтверждают лишь при 4-кратном нарастании титра антител в динамике. У детей первых двух лет жизни серологические реакции часто бывают отрицательными. Аллергические пробы Аллергические пробы путем введения внутрикожно 0,1 мл аглютиногена (10 ЕД) проводят чаще при массовых эпидемиологических обследованиях. Профилактика и лечение Для вакцинопрофилактики используют тривакцину АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная), содержащую убитые коклюшные бактерии в 1 фазе (S-форме). Для лечения используют противококлюшный иммуноглобулин и антибиотики: тетрациклины, макролиды (эритромицин). 92. Возбудитель туберкулеза: биологические свойства, особенности химического состава, факторы патогенности. Эпидемиология и патогенез туберкулеза. Методы лабораторной диагностики туберкулеза. Особенности аллергических проб. Специфическая и неспецифическая профилактика туберкулеза, химиопрофилактика. Возбудителями туберкулеза у человека являются М. tuberculosis (более 90% всех случаев туберкулезной инфекции, М. bovis (5%) и М. africanum (около 3%, главным образом среди населения стран тропической Африки). М. tuberculosis открыт Р. Кохом в 1882 г. Морфология и физиология Микобактерии туберкулеза - грамположительные прямые или слегка изогнутые палочки. В состав микобактерии входят липиды (10-40%), миколовая, фтионовая, туберкулостеариновая и другие жирные кислоты. Структурный скелет клеточной стенки микобактерии представляет собой два ковалентно связанных полимера - миколат арабиногалактазана и пептидогликан, к которому присоединены белки, полисахариды, липиды. Такой сложный химический комплекс с высоким содержанием липидов придает клеткам микобактерии туберкулеза ряд характерных свойств: устойчивость к кислотам, щелочам и спирту, а также гидрофобность. Для окраски туберкулезных палочек применяют метод Циля-Нильсена. В культурах встречаются зернистые формы, ветвящиеся, зерна Муха - шаровидные кислотоподатливые, легко окрашивающиеся по Граму. Возможен переход в фильтрующиеся и L-формы. Неподвижны, спор и капсул не образуют. Для культивирования туберкулезных микобактерии в лабораторных условиях используют специальные питательные среды, содержащие яйца, глицерин, картофель, аспарагин, витамины, соли. Чаще всего применяют яичную среду Левенштейна-Йенсена и синтетическую среду Сотона. Размножаются микобактерии туберкулеза медленно. В оптимальных условиях время генерации составляет около 15 ч, тогда как бактерии многих других родов делятся через каждые 20-30 мин. Рост туберкулезных микобактерии можно обнаружить через 2-3 недели и позднее- до 2-3 мес, особенно в первых генерациях. На плотных средах образуются морщинистые, сухие колонии с неровными краями; в жидких средах на поверхности образуется нежная пленка, которая утолщается и падает на дно, среда при этом остается прозрачной. Антигены Антигены микобактерии содержат протеины, полисахариды, липиды, фосфатиды. Антитела к ним определяются в РСК, РНГА, преципитации в геле. Имеются общие и специфические антигены у М. tuberculosis, M. bovis и других микобактерии, включая сапрофитические виды. Патогенность туберкулезных микобактерии связана с прямым или иммунологически опосредованным повреждающим действием липидов (воском Д, мураминдипептидом, фтионовыми кислотами), а также туберкулином. Их действие выражается в развитии специфических гранулем и поражении тканей. Для вирулентных штаммов характерно наличие так называемого кордфактора - гликолипида, состоящего из трегалозы и димиколата. Он разрушает митохондрии клеток инфицированного организма, тем самым нарушая функцию дыхания. Микобактерии не образуют экзотоксин. Патогенез В зоне проникновения и размножения микобактерии возникает специфический воспалительный очаг - инфекционная гранулема (первичный эффект). Затем развивается специфический воспалительный процесс в региональных лимфатических узлах и наблюдается сенсибилизация организма. Таким образом, формируется так называемый первичный туберкулезный комплекс. В подавляющем большинстве случаев первичный очаг имеет доброкачественное течение. Он рассасывается, пораженный участок кальцинируется и рубцуется. Однако этот процесс не завершается полным освобождением организма от возбудителя. В первичном очаге и лимфатических узлах туберкулезные бактерии могут сохраняться многие годы, иногда в течение всей жизни. Такие люди, оставаясь инфицированными, приобретают иммунитет к туберкулезу. При неблагоприятных заболеваниях, особенно на фоне плохих социальных факторов (недостаточное и неполноценное питание, неудовлетворительные жилищные условия, сопутствующие заболевания) может наступить активация возбудителя и генерализация процесса. Наиболее часто встречается туберкулез легких. Генерализация инфекции приводит к развитию внелегочных форм туберкулеза: кожи, костей и суставов, почек и других органов. Локализация процесса в определенной степени зависит от путей проникновения микобактерии в организм человека и вида возбудителя. Патогенетически важным является действие на организм инфицированного человека туберкулина. Впервые это вещество получил Р. Кох в 1890 г., а изученный им препарат был назван «старый туберкулин». Очищенный от примесей туберкулин (PPD - очищенный протеиновый дериват) является белком. Внутрикожное введение туберкулина вызывает у инфицированных микобактериями людей местную воспалительную реакцию в виде инфильтрата и покраснения (реакция Манту). Неинфицированные люди никакой реакции на введение туберкулина не дают. Эту пробу применяют для выявления инфицированных, сенсибилизированных людей. Экология и эпидемиология В естественных условиях М. tuberculosis обитают в организме своих хозяев - людей и некоторых животных (крупный рогатый скот, свиньи). Источником инфекции являются больные люди и животные. При активно протекающем туберкулезе с наличием воспалительно-деструктивных изменений они выделяют микобактерии в окружающую среду. Более 80% населения инфицируется туберкулезными микобактериями в раннем возрасте. Наиболее распространен воздушно-капельный путь заражения, при котором возбудитель проникает в организм через верхние дыхательные пути, иногда через слизистые оболочки пищеварительного тракта или через поврежденную кожу. Попадая в окружающую среду, микобактерии туберкулеза длительное время сохраняют свою жизнеспособность. Так, в высохшей мокроте они выживают в течение нескольких недель, на предметах, окружающих больного (белье, книги) - более 3 мес, в воде - более года, в почве - до 6 мес, длительно сохраняются в молочных продуктах. К действию дезинфицирующих веществ микобактерии туберкулеза более устойчивы, чем другие бактерии, требуются более высокие концентрации и более длительное время воздействия для их уничтожения. При кипячении погибают мгновенно, чувствительны к воздействию прямого солнечного света. Взятие материала для исследования Патологическим материалом служат мокроты, слизи с задней стенки глотки, плевральный экссудат, гной, спинномозговая жидкость, промывные воды бронхов и желудка, моча, испражнения, пунктаты, реже кровь и др.. Больной собирает мокроту в баночку или карманную плевательницу. Лучшие результаты получают при исследовании мокроты, собранной в течение 12 - 24 час. Бактериоскопический метод Непосредственно из мокроты или осадка, получаемого после центрифугирования гомогенизированный материала изготовляют мазки. В препаратах, окрашенных по Цилю-Нильсену, возбудитель туберкулеза имеет вид тонких сплошных палочек рубиново-красного цвета, расположенные поодиночке или группами преимущественно вне клеток. Туберкулезные палочки светятся золотистым светом на темно-зеленом фоне( Как флуорохромами используют также аурамин, акридинового оранжевого и др). Для выявления L-форм микобактерий применяют преимущественно фазово-контрастную микроскопию. Существенным недостатком бактериоскопического метода является невысокая чувствительность: микобактерии можно обнаружить в мазке только при наличии 50-100 тыс. микробных тел в 1 мл патологического материала. Кроме того, этим методом невозможно отличить возбудителя туберкулеза от других микобактерий и определить его чувствительность к химиопрепаратам. Для повышения частоты нахождения микобактерий туберкулеза в исследуемом материале (особенно в мокроте) применяют методы обогащения - гомогенизации и флотации. Бактериологический метод диагностики Бактериологический метод диагностики значительно эффективнее, чем бактериоскопический. Он позволяет выявить в 1 мл исследуемого материала 20-100 и более микобактерий. Определение устойчивости микобактерий к химиопрепаратам Лекарственную устойчивость возбудителей туберкулеза определяют способом серийных разведений.В современных условиях наиболее распространены такие методы определения лекарственной устойчивости микобактерий: 1) культивирования на плотной среде Левенпггейна-Иенсена; 2) микрокультивування на стеклах за Прайсом; 3) глубинные посевы в полусинтетические среды. В пробирки, содержащие различную концентрацию препаратов, и в одну контрольную (без туберкулостатиками) засевают взвесь выделенной культуры (500 млн микробных тел в 1 мл). Культуру считают чувствительной, если в пробирке с препаратом выросло менее 20 колоний при обильном росте в контроле. Биологический метод Биологический метод диагностики туберкулеза - заражение гвинейских свинок - является чувствительным. В последнее время все шире используют биопробу на белых мышах, заражая их интрацеребральном. Постановка биологических проб на лабораторных животных - это своеобразный "золотой стандарт" при диагностике туберкулеза. Серологическая диагностика Для выявления противотуберкулезных антител первоначально были предложены реакции агглютинации, преципитации и связывания комплемента. Теперь их используют редко. Зато стали широко практиковать реакцию непрямой гемагглютинации. Как антиген в ней используются сенсибилизированные эритроциты барана или человека О-группы. При туберкулезе РНГА бывает положительной в 70-90% случаев. Хорошие результаты дает также иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг и реакция агрегат-гемагглютинации для определения циркулирующих иммунных комплексов. Еще точнее есть радиоиммунный метод, но из-за высокой стоимости диагностикумов и отсутствие радиометрической аппаратуры он редко используется в лечебных учреждениях. Аллергический метод Туберкулиновая внутрикожная проба Манту является специфическим диагностическим тестом. Его используют для определения инфицированности населения туберкулезом, массового обследования на туберкулез детей и подростков, отбора лиц, которым необходимо проводить ревакцинацию, проверять ее эффективность, а также с целью диагностики туберкулеза и определение активности процесса Для постановки пробы используют туберкулин. В 1890 г. Роберт Кох предложил первый препарат, так называемый старый туберкулин Коха (Alttuberkulin Koch или ATK. Начиная с 1934 p., Для постановки аллергических проб Зейберт предложил высокоочищенный препарат туберкулина, который назвали PPD-S (Purified protein derivative - Seibert). Результаты аллергической пробы оценивают через 72 ч по следующей схеме: отрицательная проба - полное отсутствие папулы; сомнительна - папула размером 2-4 мм или только гиперемия любого размера; положительная - папула диаметром 5 мм и более гиперергическая - у детей и подростков папула диаметром 17 мм и более, у взрослых - 21 мм и более. Профилактика и лечение Для специфической профилактики используют живую вакцину БЦЖ - BCG (Bacille Calmette-Guerin). Штамм BCG был селекционирован А. Кальметтом и Ш.Гереном путем длительного пассирования туберкулезных бактерий бычьего типа (M.bovis) на картофельно-глицериновой среде с добавлением желчи. В нашей стране вакцинируются против туберкулеза все новорожденные на 5-7-й день жизни. Ревакцинацию проводят лицам с отрицательной туберкулиновой пробой с интервалом в 5-7 лет до 30-летнего возраста. Тем самым создается инфекционный иммунитет с гиперчувствительностью замедленного типа. 93. Возбудители микобактериозов: биологические свойства, классификация бактерий. Возбудитель лепры - биологические свойства, особенности культивирования. Эпидемиология, патогенез, формы проявления, профилактика, диагностика лепры и микобактериозов. В состав рода Mycobacterium семейства Mycobacteriaceae отдела Firmicutes включены неподвижные аэробные грамположительные палочковидные бактерии. Иногда они образуют нитевидные структуры, напоминающие мицелий грибов. Для микобактерий характерно высокое содержание липидов, фосфатидов и восков в клеточных стенках (до 60%), что определяет их щёлоче-, спирто- и кисдотоустойчивость. Поэтому микобактерии плохо воспринимают анилиновые красители и обычные способы окрашивания. Для окраски применяют интенсивные методы, обычно Циля-Нильсена. Растут медленно или очень медленно; сапрофитические виды растут несколько быстрее. Некоторые виды образуют каротиноидные недиффундирующие в среду пигменты. Микобактерии широко распространены в окружающей среде и вызывают поражения, известные как микобактериозы Заболевания регистрируют у различных холоднокровных и теплокровных животных; наиболее характерны поражения кожи, лёгких и лимфатических узлов. При классификации микобактерий учитывают патогенность для человека, способность к пигментообразованию, скорость роста и способность синтезировать никотиновую кислоту (ниацин). • По патогенности выделяют собственно патогенные (вызывающие конкретные заболевания), потенциально патогенные и сапрофитические микобактерии. Патогенными для человека свойствами обладают М. tuberculosis, M. leprae, M. bovis. • По скорости роста выделяют быстрорастущие (дают видимый рост на . 4-7-е сутки), медленнорастущие (рост наблюдают через 7-10 и более дней) и не растущие на искусственных средах (М. leprae) виды микобактерий. • По способности образовывать пигменты выделяют фотохромогенные (образуют пигмент на свету), скотохромогенные (образуют пигмент в темноте) и нефотохромогенные (не образуют пигмента) виды микобактерий. Возбудитель лепры (проказы) - М. leprae описан Г. Гансеном в 1973 г. Лепра - хроническое инфекционное заболевание, встречающееся только у людей. Заболевание характеризуется генерализацией процесса, поражением кожи, слизистых оболочек, периферических нервов и внутренних органов. Морфология, физиология Микобактерии лепры - прямые или слегка изогнутые палочки. В пораженных тканях микроорганизмы располагаются внутри клеток, образуя плотные шаровидные скопления - лепрозные шары, в которых бактерии тесно прилегают друг к другу боковыми поверхностями («пачка сигар»). Кислотоустойчивы, окрашиваются по методу Циля-Нильсена в красный цвет. На искусственных питательных средах микобактерии лепры не культивируются. Антигены Из экстракта лепромы выделены 2 антигена: термостабильный полисахаридный (групповой для микобактерии) и термолабильный белковый, высокоспецифичный для лепрозных бактерий. Патогенность и патогенез Вирулентность М. leprae по-видимому связана с теми же факторами, которые были описаны для М. tuberculosis. Это прежде всего связано с высоким содержанием липидов в бактериальных клетках. Инкубационный период от 3-5 лет до 20-35 лет. Заболевание развивается медленно, в течение многих лет. Различают несколько клинических форм, из которых наиболее тяжелая и эпидемически опасная - лепроматозная: на лице, предплечьях, голени образуются множественные инфильтраты-лепромы, в которых содержится огромное количество возбудителей. В дальнейшем лепромы распадаются с образованием медленно заживающих язв. Поражаются кожа, слизистые оболочки, лимфатические узлы, нервные стволы, внутренние органы. Другая форма - туберкулоидная. Она протекает клинически легче и менее опасна для окружающих. При этой форме поражается кожа, нервные стволы и внутренние органы реже. Высыпания на коже в виде мелких папул сопровождаются анестезией. В очагах поражений возбудители обнаруживаются в незначительном количестве. Экология и эпидемиология Естественным резервуаром и источником возбудителя лепры является больной человек. Лепра - малоконтагиозное заболевание. Заражение происходит при длительном и тесном контакте с больным. В настоящее время по данным ВОЗ в мире около 10-12 млн. больных проказой. Заболевание распространено преимущественно по берегам южных морей и больших водоемов (Индия, страны Центральной и Южной Африки). жүктеу/скачать 0,95 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|