Қазақстан республикасы ауыл

225
Молекулярно-генетическая диагностика основана на идентификации рода и вида 
гельминта на основе особенностей расположения и цепи нуклеотидной цепочки. 
Однозначно перед проведением необходимо выделение ДНК из небольшого фраг-
мента паразита. Данный процесс проводится предварительно путем отсечения неболь-
шой части проглоттиды или проглоттиды с сколексом. В зависимости от проводимого 
исследования и состояния материала существуют различные методы выделения ДНК. В 
основном используют фенол-амин-хлороформный метод. Однако данный метод требует 
осторожности и проведением этапов под вытяжкой.
По возможности используют наборы для выделения. Выделив ДНК необходимо опре-
делить концентрацию ДНК каждого исследуемого объекта [3].
Поскольку ПЦР является новой разработкой и становится востребованным, этот ме-
тод позволяет определить особенность длины цепочки, а также другие генетические осо-
бенности. 
Преимуществом этого метода является наибольшая точность и упрощенность анали-
за: поскольку морфологически с помощью окрашивания и микроскопирования среза го-
раздо сложнее определить вид Taenia по особенностям внешнего и внутреннего строения 
на примере Mesocestodes и Taenia krabbei [4].
В ходе исследования мы отделяли часть тела взрослых червей семейства Taenia. Для 
проведения ПЦР анализа были использованы видоспецифические праймеры cox1. Вы-
бор последовательности праймеров был основан на том, что он является единственной 
областью rDNA и mDNA, которая достаточно вариабельна, чтобы различать полимор-
физмы внутри видов паразитов. 
Постановку реакции проводили по общепринятой схеме. В котором были установ-
лены следующие параметры, денатурация образцов проходила при 95˚С - 30 сек, отжиг 
праймеров при 60˚С - 30сек, и элонгация, реплицирование матричной цепи при 72˚С - 
1мин, всего было 40 циклов [5]. 
Полученные ПЦР продукты анализировали с помощью 1,2 % агарозного электрофо-
реза, данные которого приведены на рисунке 1.
Рисунок 1 - Результаты постановки ПЦР в электрофорезном геле, отработка праймера 
cox1: М – маркер1,2,3,4,5 – изучаемые образцы, К- – отрицательный контроль
На основе изученных данных длина нуклеотидных последовательностей у семейства 
Taenia при постановке с видоспецифическим праймером cox1 равно 448 п.н.
Для нашего исследования преимуществом метода было то, что он позволяет устано-
вить гельминт на уровне ДНК, к тому же продукты ПЦР далее могут быть использованы 
для постановки секвенирования и подробной расшифровки нуклеотидов и сравнением 
результатов с данными по BLASTtn.
Значимость этих данных намного выше, чем исключительно морфологический скри-
нинг. Поскольку при наблюдении за незнакомой морфологией паразитологи часто об-

226
ращаются к атласам и учебникам, чтобы определить тип рассматриваемого гельминта и 
могут быть допущены ошибки идентификации, к примеру затруднителен подсчет коли-
чества крючьев при микроскопии [6]. 
Таким образом, можно сделать вывод, что использование методов молекулярно - гене-
тической дифференциации, оправдывает исследование и позволяет оптимально изучить 
наличие мутации или полиморфизма. Эти методы позволяют более тщательно изучить 
структуру и расположение нуклеотидов в цепи ДНК, что, в свою очередь, делает анализ 
более точным и является неотъемлемой преимущественной частью паразитологического 
исследования.
Исследование, представленное выше, было проведено при финансовой поддержке 
Министерства образования и науки Республики Казахстан в рамках проекта AP08052252 
на 2020-2022 годы.

жүктеу/скачать 5,46 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: