Инсулин алу бірқатар сатылардан тұрады: - 1. Химиялық синтез арқылы А және В тізбектерінің түзілуін кодтайтын нуклеотидтердің бірізділігі жасалады (синтетикалық гендер жасау).
- 2. Синтетикалық гендердің әрқайсысын плазмидтерге енгізеді (бір плазмидке А тізбегін синтездейтін ген енгізіледі, басқа плазмидке В тізбегін синтездейтін ген енгізіледі).
- 3. Бетагалактозидаза ферментінің түзілуін кодтайтын ген енгізіледі. Бұл ген плазмидтердің белсенді репликациясына қол жеткізу үшін әрбір плазмидке қосылады.
4. Плазмидтер клеткаға E. coli- ішек таяқшасын енгізеді және продуценттің екі мәдениетін алады, бір дақыл А-тізбегін, екіншісі В-тізбегін синтездейді. - 4. Плазмидтер клеткаға E. coli- ішек таяқшасын енгізеді және продуценттің екі мәдениетін алады, бір дақыл А-тізбегін, екіншісі В-тізбегін синтездейді.
- 5. Ферментерге екі дақыл салады. Ортаға бетагалактозидаза ферментінің пайда болуын индукциялайтын галактозаны қосады. Бұл ретте плазмидтер белсенді репликаланады, плазмидтердің көптеген көшірмелерін және демек, Аи және В тізбектерін синтездейтін көптеген гендерді құрайды.
- 6.Мұның бәрін бромцианмен өңдейді және А және В тізбектерін бетагалактозидазадан ажыратады. Одан кейін А және В тізбектерін одан әрі тазарту және бөлу жүргізіледі.
- 7. Цистеин қалдықтарын тотықтырады, инсулинді байланыстырады және алады.
Мұндай әдістің кемшіліктері: екі жеке штамма-продуцентті алу керек, екі ферментация, екі бөлу және тазарту процедураларын жүргізу керек, ең бастысы, дисульфидтік байланыстардың дұрыс тұйықталуын қамтамасыз ету қиын, яғни белсенді инсулин алу.
Адам инсулин генін алғаш рет 1978 ж. «Генентек» фирмасы (АҚШ) синтездей алды. - Адам инсулин генін алғаш рет 1978 ж. «Генентек» фирмасы (АҚШ) синтездей алды.
- Соматостатин гені сияқты инсулиннің синтетикалық, гені плазмидаға — галактозидаза генімен, соңына енгізілді. Мұнда әрбір бактериялық клеткада инсулиннің шамамен 100 000 молекуласы синтезделді
- Е.СоІі клеткасында проинсулиннің биосинтезі іске асты; ол үшін кері транскриптазаның көмегімен РНҚ-дан оның ДНҚ-көшірмесі синтезделді.
Достарыңызбен бөлісу: |
