Лекция №1 Тема: Основы клинико-биохимической аналитики: объекты и методы исследования; оценка и интерпретация результатов; единицы си; нормы (референтные величины); контроль качества исследований
жүктеу/скачать 0,62 Mb.
|
лекций
- Бұл бет үшін навигация:
- Электрофорез.
| Флюориметрия использует такое явление, как люминисценция, т. е. свечение веществ без нагревания. Флюо-риметрические приборы (флюориметры) чаще всего используют фотолюминисценцию - свечение, возникающее под действием ультрафиолетового облучения и хемилюминисценцию - свечение, возникающее в процессе протекания химической реакции. Методы флюориметрии характеризуются высокой специфичностью и чувствительностью.
Электрофорез. Под электрофорезом понимают процесс разделения заряженных частиц в электрическом поле. Многие биологически важные молекулы (белки, аминокислоты, нуклеиновые кислоты и др.) имеют в своем составе ионизирующие группы. Поэтому в биологических жидкостях (крови, лимфе и др.) они существуют в виде катионов и анионов. Помимо этого молекулы имеющие примерно одинаковый заряд могут отличаться молекулярными массами и отношением заряда к массе. На этих различиях и основано разделение ионов при движении их в растворе под действием электрического поля. Скорость перемещения зависит от величины заряда, а также в ряде случаев, от размера и формы молекул. Так как в большинстве случаев молекулы отличаются по своим физическим и химическим свойствам то очень немногие из них имеют одинаковую электрофоретическую подвижность. Скорость движения частиц (см/с) при напряженности электрического поля 1 В/см называется электрофоретической подвижностью. В зависимости от способа проведения электрофореза его делят на свободный или фронтальный, когда элек-трофоретическое разделение осуществляется в водной фазе и зональный, или электрофорез на поддерживающей среде, когда разделение осуществляется на каком-либо инертном носителе (бумага, асбестовые пластины, целлюлоза, агаровый, крахмальный и полиакриламидный гели и др.). Важными характеристиками процесса зонального электрофореза являются градиент потенциала (В/см) и сила тока, приходящаяся на 1 см поперечного сечения полосы (плотность тока - мА/см). Низковольтный электрофорез используется для разделения высокомолекулярных соединений типа белков, ли-попротеинов, гликопротеинов и др. Высоковольтный электрофорез используется для разделения низко молекулярных веществ, типа аминокислот, их производных и др. Так как различие в разряде и молекулярной массе у таких веществ невелико, то нужен большой градиент потенциала, чтобы произошло эффективное разделение частиц. Так как при этом происходит значительное разогревание носителя, требуются специальные устройства для его охлаждения. Хроматография. Это метод разделения многокомпонентных систем, основанный на использовании явлений сорбции в динамических условиях. В процессе хроматографии происходит многократное повторение актов сорбции и десорбции вещества при перемещении его в потоке подвижной фазы вдоль неподвижного сорбента. Вещество подвижной фазы непрерывно вступает в контакт с новым участком сорбента и частью сорбируется, а сорбированное вещество контактирует со свежими порциями подвижной фазы и частично десорбируется. Методы хроматографического анализа различаются: по агрегатному состоянию системы, в которой проводится разделение на газовую и жидкостную: по механизму разделения- на адсорбционную, распределительную, ионообменную, гель- хроматографию, аффинную и др. жүктеу/скачать 0,62 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|