Полученные результаты
жүктеу/скачать 16,64 Kb.
|
реферат микро
|
Абстрактный Фон Рак полости рта, крупнейшая разновидность рака головы и шеи, за последние два десятилетия стал одним из самых смертоносных злокачественных новообразований . Несмотря на то, что для раннего выявления злокачественных новообразований полости рта было применено несколько диагностических инструментов, выявление новых опухолевых маркеров по-прежнему остается актуальным. В этом исследовании мы исследовали N -гликомы клеточной поверхности первичных культивируемых кератиноцитов полости рта человека (HOK), иммортализованных кератиноцитов десны человека (клетки SG) и плоскоклеточного рака полости рта (OC2). Методы Ферментативно гидролизованные N -гликаны клеточной поверхности анализировали с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF. Полученные результаты Высокие уровни фукозилированных N -гликанов, особенно ядерных фукозилированных N -гликанов, наблюдались на поверхности клеток OC2, тогда как основные N -гликаны на клетках SG и HOK были с высоким содержанием маннозы . Кроме того, уровень экспрессии мРНК фукозилтрансферазы 8 был значительно повышен в клетках OC2, чем в клетках SG и HOK. Затем ядро-фукозилированные гликопротеины клеток OC2 были очищены с помощью лектиновой аффинной хроматографии и была идентифицирована ключевая молекула адгезии в раковых клетках , CD147. Наконец, сверхэкспрессия CD147 клеточной поверхности была подтверждена на клетках OC2 и тканях рака полости рта (массив тканей). Выводы CD147 был обнаружен с помощью гликопротеомных подходов и предложен в качестве потенциального нового онкомаркера для диагностики рака полости рта.полости рта , гликозилирование и взаимосвязь между гликозилированием и онкогенезом полости рта все еще плохо изучены. . Здесь мы исследовали N -гликомы клеточной мембраны на трех клеточных моделях, включая первичные культивированные кератиноциты полости рта человека (HOK), иммортализованные кератиноциты десны человека (клетки SG) и плоскоклеточную карциному полости рта (OC2). Впоследствии были проанализированы уровни экспрессии генов фукозилтрансфераз. Кроме того, несколько известных гликопротеинов адгезии, ассоциированных с опухолью, были выделены и идентифицированы с помощью лектиновой аффинной хроматографии (LAC) и масс-спектрометрии из клеток OC2. Экспрессию обнаруженного опухолевого маркера затем подтверждали на клетках SG/OC2 и подтверждали с помощью иммуногистохимии на основе массива тканей рака полости рта. Введение Рак полости рта, подтип рака головы и шеи, является одним из наиболее часто диагностируемых видов рака во всем мире. Почти две трети случаев рака полости рта диагностируются у мужчин . Опухоли полости рта возникают из губ, языка, щек, дна полости рта, твердого и мягкого неба, пазух и глотки. Основными факторами риска развития рака полости рта являются курение, употребление алкоголя, плохая гигиена полости рта и жевание бетеля . Плоскоклеточный рак полости рта (ПКРП) — наиболее частый гистологический тип рака полости рта (встречается более чем в 90% случаев) ]. Плоскоклеточный рак полости рта является шестым по частоте раком в США . В последние годы выживаемость при раке полости рта резко снизилась в США , Венгрии ,Индии ,Южной Азии и Тайване. Хирургия, лучевая терапия и химиотерапия являются жизненно важными взаимодополняющими стратегиями лечения рака головы и шеи [12]. Из-за высокой распространенности и смертности от рака полости рта важными стратегиями лечения этого заболевания также являются профилактика, раннее вмешательство и более глубокое понимание молекулярных механизмов онкогенеза и предрасположенности к опухолям, обнаруженным при раке полости рта. Гликозилирование является наиболее распространенной посттрансляционной модификацией в эукариотических клетках ]. Известно, что сокращение или модификация углеводного состава коррелирует с изменениями стабильности, транспортировки и клиренса белков, а также с рядом биологических событий, включая межклеточную адгезию, воспаление, инфицирование бактериями и вирусами, онкогенез и метастазирование [15]. Трансформация и злокачественность клеток часто сопровождаются необычными изменениями в структуре олигосахаридов в белках клеточной поверхности ]. Молекулярные изменения, возникающие при злокачественной трансформации, можно охарактеризовать с помощью специфических моноклональных антител и масс-спектрометрии Изменения в гликозилировании включают недостаточную или сверхэкспрессию встречающихся в природе гликанов, аномальные гликаны, а также неоэкспрессию гликанов, которые обычно ограничены эмбриональными тканями. Преимущественно эти структурные изменения связаны с экспрессией гликозилтрансфераз в теле Гольджи. Хотя изменения гликозилирования в сыворотке крови или злокачественные образования, по-видимому, связаны с клеточной инвазией и стадией злокачественных новообразований полости рта гликозилирование и взаимосвязь между гликозилированием и онкогенезом полости рта все еще плохо изучены. . Здесь мы исследовали N -гликомы клеточной мембраны на трех клеточных моделях, включая первичные культивированные кератиноциты полости рта человека (HOK), иммортализованные кератиноциты десны человека (клетки SG) и плоскоклеточную карциному полости рта (OC2). Впоследствии были проанализированы уровни экспрессии генов фукозилтрансфераз. Кроме того, несколько известных гликопротеинов адгезии, ассоциированных с опухолью, были выделены и идентифицированы с помощью лектиновой аффинной хроматографии (LAC) и масс-спектрометрии из клеток OC2. Экспрессию обнаруженного опухолевого маркера затем подтверждали на клетках SG/OC2 и подтверждали с помощью иммуногистохимии на основе массива тканей рака полости рта. Культура клеток Первично культивированные нормальные кератиноциты полости рта человека использовали в качестве нормального контроля по сравнению с иммортализованными кератиноцитами десны и клетками плоскоклеточной карциномы полости рта. Клеточная линия SG представляет собой иммортализованную клеточную линию кератиноцитов, полученную из клинически здоровой десны взрослого человека . Эта линия клеток использовалась для проверки токсичности различных стоматологических материалов, таких как HAMA, фторидные композитные материалы и бисфенол А .Линия клеток рака полости рта OC2 получена из злокачественных поражений. Анализ N -гликомов в клетках HOK, SG и OC2 Глобальная карта N -гликозилирования на основе МС дает структурный отпечаток пальца, иллюстрирующий общий гликановый состав образцов Был проведен MALDI-MS-анализ перметилированной PNGазы-F, высвободившей N -гликаны из клеток HOK , SG ) и OC2 . Основные пики спектра и соответствующие им предполагаемые структуры N -гликанов, а также фукозилированные ядра N -гликановых структур. Обсуждение Гликозилирование клеточной поверхности не только регулирует стабильность и активность структурных белков и рецепторов на клеточной мембране, но также участвует в поддержании морфологии клеток и межклеточных взаимодействиях [38], [39], [40]. Регуляция гликановых структур в гликопротеинах клеточной поверхности опосредована уровнями экспрессии и активностью гликозилтрансфераз ]. В нашем исследовании структуры N -гликанов клеточных мембран были идентифицированы и охарактеризованы с помощью масс-спектрометрии. Клетка жүктеу/скачать 16,64 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|