|
Метод Грама
|
Метод Бурри-Гинса
|
|
Цель применения
|
Для отличия одних видов бактерий от других (грамположительных от грамотрицательных), что является важным таксономическим признаком
|
Для выявления капсул у чистых культур капсульных бактерий
|
Реактивы:
Красящие растворы
|
Карболовый генцианвиолет или пропитанная им фильтровальная бумажка
Водный раствор фуксина или пропитанная им фильтровальная бумажка
|
Тушь
Разведённый (1:3) карболовый фуксин Циля
|
Протрава
|
Раствор Люголя – на 300 мл дист воды 1,0 г йода и 2,0 г KI
|
|
Дифференцирующее вещество
|
Этиловый спирт
|
|
Способ фиксации, состав фиксатора
|
В пламени горелки
|
В пламени горелки
|
Этапы окраски
|
На фиксированный мазок поместить фильтр.бумажку, пропитанную генцианвиолетом, смочить её водой, выдержать 3 минуты
Снять бумажку, слить с препарата оставшуюся краску и налить р-р Люголя на 1 минуту.
Слить р-р Люголя, провести дифференциацию, погрузив препарат несколько раз в стаканчик со спиртом (пока не перестанут отходить фиолетовые струйки)
Тщательно промыть препарат водой
Дополнительно подкрасить препарат с помощью красящей бумажки, пропитанной р-ром карболового фуксина, в течение 3 минут.
Промыть водой, высушить.
|
На предметное стекло нанести рядом каплю туши и каплю воды, в которой суспензировать внесённую петлёй капсульную культуру
Обе капли соединить в одну и размазать её тонким слоем с помощью второго предметного стекла
Высохший на воздухе мазок осторожно фиксировать в пламени горелки
Докрасить препарат разведённым карболовым фуксином Циля в течение 2-3 мин, после чего промыть водой и высушить.
|
Сущность метода
|
При окраске генцианвиолетом и последующем воздействии раствором Люголя образуется комплексное соединение краски с йодом, которое при дифференциации спиртом удерживается в клетках грамположительных (они остаются фиолетовыми) и удаляются из грамотрицательных (при дополнительной окраске фуксином приобретают красный цвет). Способность бактерий удерживать комплекс генцианвиолета с йодом зависит, главным образом, от строения клеточной стенки, имеющей существенные различия у грамположительных и грамотрицательных бактерий.
|
Фуксин окрашивает тела бактерий в красный цвет, капсулы остаются неокрашенными.
|
Результат: описание микроскопической картины
|
В поле зрения видны стафилококки сине-фиолетового цвета – грамположительные – и расположенные между ними кишечные палочки, имеющие красный цвет, т.е. грамотрицательные.
|
В поле зрения видны бациллы красного цвета, окруженные белыми ореолами капсул, которые хорошо видны на серовато-коричневом тушевом фоне.
|
