Таблица 2.3.1. - Состав питательной среды Мурасиге – Скуга
Компоненты
Содержание,
мг/л
Компоненты
Содержание,
мг/л
NH4NO3
1650,0
Na2EDTA
37,3
KNO3
1900,0
Рибофлавин (B2)
0,1
CaCl2.2H2O
440,0
Мезоинозит
100,0
MgSO4.7H2O
370,0
Тиамин – HCl
0,1
KH2PO4
170,0
Пиридоксин – HCl
0,5
KI
0,83
Никотиновая кислота
0,5
MnSO4 4H2O
22,30
ИУК
2,0
ZnSO4.7H2O
8,6
Глицерин
2,0
Na2MoO4.2H2O
0,25
Кинетин
0,2
CuSO4.5H2O
0,025
Сахароза
30,000
CoCl2.6H2O
0,025
Агар –агар
7000
FeSO4.7H2O
27,8
pH
5,6-5,8
42
Содержание пластидных пигментов определяли по оптической плотности
ацетоновой вытяжки на спектрофотометре LKB Ultrospec – II при 662 нм, 644
нм и 440 нм., а расчеты проводились по уравнению Хольма-Веттштейна [102].
Полученные экспериментальные данные статистически обработаны [39].
2.3.1. Схема проведения опытов
Опыт 1
.
Отработка режимов стерилизации. В исследовании использованы
такие химические компоненты, как диацид, хлорамин, гипохлорид Са, спирт
этиловый, вода в различных концентрациях, последовательности и
длительности действия, а также антибиотики стрептомицин и нистатин.
Опыт 2.
Подбор питательных сред и регуляторов роста для введения
эксплантов граната и инжира в культуру
in vitro
. В качестве базовой среды
использовали широко распространенную среду Мурасиге-Скуга с добавлением
витаминов В
1
; В
6
; В
12;
РР; С, а также мезоинозита. В качестве фитогормонов
использовали нафтилуксусную кислоту (НУК); индолилмасляную кислоту
(ИМК); индолилуксусную кислоту (ИУК); кинетин (К); 6-бензиламинопурин
(6-БАП), дополнительно добавляли и сахарозу. Для каждого варианта
использовали свою концентрацию.
Опыт 3.
Изучение влияния срока изоляции эксплантов на их
морфогенную активность. Апикальные и пазушные почки вычленялись в
течение года (январь-декабрь) с последующим введением в культуру
in vitro
.
Опыт 4.
Подбор оптимальных композиций ростовых веществ для
укоренения эксплантов. В исследованиях, в качестве индукторов ризогенеза
были использованы нафтилуксусная кислота (НУК), β-индолилмасляная
кислота (ИМК) и кинетин (К), как по отдельности, так и в сочетании.
Опыт 5.
Подбор оптимальных компонентов и сочетаний субстратов для
адаптации регенерантов в нестерильных условиях. После развития корневой
системы пробирочные растения пересаживали в горшочки с различными
типами субстрата для адаптации к условиям
in vivo
.
|