Жем шөп өндірісіндегі биотехнология Жемшөптік культуралардың клеткалық және ұлпалық биотехнологиясы
Генетикалық трансформация кезінде өсімдіктердің регенерациясы
жүктеу/скачать 2,17 Mb.
|
лекция
| Генетикалық трансформация кезінде өсімдіктердің регенерациясы
Бұл мақсатқа шалғынды беде өсімдіктері 4,0 мг/л 6-бензиламинопурин (БАП), 1,0 мг/л кинетин және 0,05 мг/л α-нафтилcірке қышқылы (НІҚ) бар Гамборг B5 қоректік ортасындағы гипокотилді экспланттардан индукцияланған морфогендік дақылдардан тікелей регенерация арқылы алынады: Өскіндердің эпикотильді бөлігін бастапқы генотипті өсімдіктердің in vitro және in vivo мәдениетінде сақтау үшін Гамборг В5 гормонсыз немесе микрокөбею үшін сол құрамдағы ортаға 2 мг/л БАП қосылған ортада бөледі және өсіреді. Трансформация процесінде алынған шабындық беде өсінділері мен өсімдіктері Гамбург В5 орталарында цефотаксимді қоспай 40 мг/л канамицинмен және 0.05 мг/л НІҚ орталарында орнықтырылады. Генетикалық және морфологиялық белгілері бойынша тікелей регенерация әдісімен гипокотилді экспланттардан алынған өсімдіктер бастапқы генотиптерден ерекшеленбейді және 50 мг/л канамицині бар қоректік ортада 24-ші пассажға дейін белсенді пролиферация және жасыл өскіндердің жаппай түзілу қабілетін сақтайды. Бір пассаж кезінде (І ай) Бір Петри табақшасынан морфогендік ұлпадан орта есеппен 100-ден астам жасыл өскін алынады және олардың жалпы саны 1000 дана немесе одан да көп және тек практикалық селекция қажеттіліктерімен және фитотрондағы аумақпен шектеледі. Өзгергіштікті бақылау үшін гипокотилдер мен бастапқы өсімдіктерден тікелей регенерация әдісімен алынған регенерантты өсімдік жасушаларындағы хромосомалық және хроматидтік қайта құрылымдардың саны анықталады. Фрагменттері мен көпірлері бар хроматидті қайта құру саны, аберрацияның жалпы пайызы, митоздық индекс, плоидтылық есептеледі. Тікелей регенерация әдісімен алынған бастапқы генотиптер мен регенерант өсімдіктердің морфологиялық және экономикалық-құнды белгілері бойынша салыстырмалы бағалау вегетациялық және далалық жағдайларда жүргізіледі. Осылайша, тікелей регенерацияның жаңа тәсілі әртүрлі мақсатты гендерді тасымалдайтын конструкцияларды пайдалана отырып, бір генотипке негізделген генетикалық трансформация процесінде бастапқы кескіннің барлық құнды белгілерін толығымен сақтайтын генетикалық аналогтарды жасауға мүмкіндік береді; селективті орталарда ұзақ мерзімді пролиферацияға және канамицинге төзімді өсімдіктердің жаппай регенерациясына қабілетті морфогендік дақылдарды in vitro алу және сақтау; сомаклоналды өзгергіштікті бақылау және генетикалық трансформация процесінде алынған селекциялық сандарға салыстырмалы генетикалық талдау жүргізу.
жүктеу/скачать 2,17 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|