Иммунохимические методы в клинической биохимии

В клинической лабораторной практике широко используются иммунохимические методы для определения традиционных биохимических объектов-белков, ферментов, гормонов, медиаторов, фармакологических препаратов и др. Достоинством их является высокая чувствительность и специфичность. Внедрение иммунохимических методов -один из способов дальнейшего совершенствования диагностики заболеваний сельскохозяйственных животных, так как многие серологические и аллергические методы, используемые в настоящее время для диагностики ряда важнейших заболеваний (туберкулез, бруцеллез, колибактериоз, сальмонеллез и др.), не обладают достаточной чувствительностью и специфичностью. Основой успеха в иммунохимических исследованиях является получение иммунных сывороток высо­кого титра и нужной специфичности.

При проведении клинико-биохимических исследований наиболее широко используются реакция иммунодиф-фузии в геле (РИД), иммуноэлектрофорез, радиоиммунологический анализ (РИА), иммуноферментный анализ (ИФА) и некоторые другие.

Радиоиммунологический анализ (РИА). В 1959 году был разработанколичественныйиммунологический метод определения инсулина с использованием гормона, меченого радиоактивным изотопом иода ¹³¹ J. В основе метода лежала конкуренция между нативным инсулином плазмы и меченым ¹³¹J- инсулином за ограниченное число специфических мест связывания на антителах к инсулину.

В основе метода, как и других методов связывания лежит один из фундаментальных законов химии- закон дей­ствия масс.

Основной принцип радиоиммунологического анализа состоит в том, что при неизменном количестве связы­вающего агента (антитела) отношение связанного антигена к свободному в состоянии равновесия находится в количест­венной зависимости от суммарного количества присутствующего антигена.

В состоянии равновесия отношение связанного антигена (В) к свободному (F) определяется соотношением

B/F= [АгАт ]/ [Аг_исх ]- [Аг_св ]

где: [Аг_исх ]- исходная концентрация антигена; [Аг_св ]- количество антигена, связанного в виде комплекса

АгАт.

Меченый антиген ведет себя так же, как и немеченый, и отношение концентрации связанного антигена и сво­бодного описывается тем же уравнением.

1. 
   В нем не использовались радиоактивные изотопы. Отсутствие радиационной опасности значительно упро­щало условия проведения (специальные помещения, оборудование ит. д.)
   
2. 
   Гораздо большая устойчивость меченых соединений (в РИА она определяется периодом полураспада изо­топов.)
   
3. 
   Возможность быстрого определения результатов ферментативной реакции с помощью обычных общедос­тупных приборов (фотометров). Возможность даже визуальной оценки реакции.
   
4. 
   ИФА легко поддается автоматизации.
   

Метод ИФА можно широко использовать для обнаружения специфических антигенов возбудителей тех же за­болеваний, а также самых различных химических соединений, которые могут выступать в качестве антигенов или гап-тенов-антибиотиков, гормональных препаратов, микотоксинов, пестицидов и др.

Методы ИФА могут быть разделены на гетерогенные (твердофазные, ELISA) и гомогенные(ЕМ.ГГ ) отличаю­щиеся по принципу проведения анализа. Гетерогенные методы ИФА основаны на использовании антигенов и антител, иммобилизованных на нерастворимых носителях (как правило пластик). Гетерогенные методы включают обязательную стадию разделения комплекса (меченое ферментом соединение - связьшаюший агент) от свободного меченого соедине­ния.

Гомогенные методы основаны на эффекте модуляции антителами активности фермента (или кофактора) ис­пользуемого в качестве метки антигена.