Лекция 9 Протопласты растительных клеток как объект биологического конструирования
Преимущества энзиматического метода по сравнению с механическим
жүктеу/скачать 219 Kb.
|
Лекция 12 - Протопласты
- Бұл бет үшін навигация:
- Выделение протопластов проводят в три этапа
- Способы культивирования протопластов
- Метод платирования.
| Преимущества энзиматического метода по сравнению с механическим:
– одновременно выделяется большое количество протопластов (до 10 млн. из грамма ткани или клеток); – клетки не подвергаются сильному осмотическому стрессу; – клетки не повреждаются; – метод сравнительно быстрый. Для удаления клеточной стенки используют ферменты трех типов: целлюлазы, гемицеллюлазы и пектиназы. Комбинация ферментов и их соотношение специфично для каждого типа клеток. Выделение протопластов проводят в три этапа: – обработка ферментами; – выделение протопластов из клеточных стенок; – отделение интактных протопластов от клеточных осколков. Протопласты можно выделять также из суспензионных и каллусных культур. Лучше всего - в поздней стадии логарифмического роста, когда клеточные стенки легче поддаются разрушению, а протопласты наиболее жизнеспособны. Способы культивирования протопластов Далее протопласты культивируют в тех же условиях, что и клетки. Однако способы культивирования протопластов специфичны. Состав солей может быть несколько изменен. Среда состоит из осмотического стабилизатора (сахароза, глюкоза, ксилоза, маннитол и др.), неорганических соединений, источника углерода, азота, витаминов, фитогормонов. Условия культивирования: рН среды 5,4–5,8, температура 22–28оС, невысокая освещенность (не более 2000 лк). Существуют два способа культивирования протопластов: метод жидких капель и метод платирования. Метод жидких капель. Суспензию протопластов в виде капель помещают на пластиковые чашки Петри. Вариацией этого способа является культивирование единичных изолированных протопластов в микрокаплях объемом 1 мкл, предложенное Ю. Глебой в 1978 г. Метод платирования. Суспензию протопластов наливают в пластиковые чашки Петри, добавляют равный объем той же среды с 1% агаром при температуре не выше 45оС. После остывания чашки Петри переворачивают и культивируют при 28оС. В данном случае протопласты фиксированы в одном положении и физически отделены друг от друга. Это дает возможность наблюдать за развитием интактного протопласта: формированием клеточной стенки, делением, ростом и развитием растения. Вариантом этой техники является использование кормящих протопластов или клеток, подвергнутых воздействию рентгеновского или γ-излучения, что блокирует их способность к делению. Такие протопласты или клетки смешивают с жизнеспособными протопластами и они поддерживают и стимулируют их рост. Сразу после удаления раствора фермента начинается образование клеточной стенки. Труднее добиться деления клеток и регенерации растений. Регенерация растений происходит осуществляется либо через эмбриогенез, либо через развитие каллуса с дальнейшей индукцией морфогенеза. Добиваются этого добавлением в среду ауксинов или сочетания ауксинов с цитокининами. жүктеу/скачать 219 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|