Микробиологиялыќ зертхана
Т- және В-лимфоциттерді бір препаратта (Е-РТК және 3С3-РТК
жүктеу/скачать 6,39 Mb. Pdf көрінісі
|
сабақ түсіндірген бойынша
| Т- және В-лимфоциттерді бір препаратта (Е-РТК және 3С3-РТК
әдістерімен) анықтау. 3С 3 - кешенін дайындау үшін 5 мл 0,1%-ды зимозанның дистилденген судағы ерітіндісін 30 минут су моншасында қыздырып (+80ºС), 10 минут бойы 1000 айн/мин. центрифугалайды. Оны физиологиялық ерітіндімен шайғаннан кейін қайтадан 5 мл физиологиялық ерітіндімен суспензиялайды. Ампуладағы комплементті 5 мл физиологиялық ерітіндіде араластырып, оған 5 мл зимозан суспензиясын қосады да 30 минут +37°С термостатта ұстайды. Екі мәрте физиологиялық ерітіндісімен шайып, 3 мл физиологиялық ерітіндімен немесе Игл ортасымен суспензиялайды. Нәтижесінде комплементпен өңделген (3С 3 - кешені) 0,17%-тік зимозан қоспасы пайда болады. Лимфоциттерді, 3С 3 -кешенін және 0,5%-ды қой эритроциттерінің қоспасын тең мөлшерде арнайы түтікте араластырып, 20-22ºС температурада 25 минут бойы ұстайды. Уақыт өткен соң қоспаны 5 минут аралығында 250-300 айн/мин. центрифугалап, 4ºС температурада 15-18 сағат инкубациялайды. Дайын болған препаратты зат шынысында глутаральдегидпен бекітіп, Романовский бойынша Азур-Эозинмен бояйды. Препаратқа иммерсия майын жағып, жарық микроскоп көмегімен кем дегенде 200-ге жуық лимфоциттерді табу қажет. Егерде үш және одан көп қой эритроциттері (Е-РОК) Т-лимфоциттерімен байланысса, ал үш және одан көп 3С 3 -РОК зимозан бөлшектері В-лимфоциттерімен байланысса нәтиже оң деп бағаланады. Е-РОК және 3С 3 -РОК байланыстарының пайыздық көрсеткішін шығарады. жүктеу/скачать 6,39 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|