Микробиологиялыќ зертхана
Серологиялық типтерін анықтау
жүктеу/скачать 6,39 Mb. Pdf көрінісі
|
сабақ түсіндірген бойынша
| Серологиялық типтерін анықтау.
Шыны түтіктердегі қиғаш қатырылған ЕПА-да 18-20 сағат бойы, 37ºС-та өсірілген ішек таяқшалары физиологиялық ерітінділермен шайылып, стерильді шыны түтіктерге ауыстырылады. Шайындыны 100ºС температурада 1 сағат бойы су моншасында қыздырады. Мұндай жағдайда термолабильді L- және B-антигендері талқандалады, ал термостабильді А-антигенді талқандау үшін 120ºС-та 2 сағат бойы автоклавта ұстайды. Қыздырылған бактериялардың суспензиясы бар шыны түтіктерді центрифугаға орналастырып, 10-15 минут бойы 2000-3000 айналымда тұндырады. Осы тұнбаны зат шынысының бетінде қойылатын агглютинация реакциясында (АР) антиген ретінде қолданылады. Антигеннің қалған бөлігін оптикалық стандарт бойынша, 1 мл-де 500 млн. микрб жасушасы болатындай етіп, стерильді физиологиялық ерітіндімен сұйылтқаннан кейін, оны шыны түтіктерде қойылатын АР- да қолданады. 135 E. coli- дің серотоптарын анықтау үшін зат шынысына поливалентті топтық қан сарысуларын тамызғаннан кейін, оның үстіне бактериологиялық ілмекпен центрифугаланған бактерия тұнбасын қосып, араластырады. Реакция нәтижесін 3 минуттан соң оқиды. Оң реакцияда сұйықтық мөлдірленеді және ұсақ түйіршікті агглютинат пайда болады. Теріс нәтижеде тамшы еш өзгеріссіз қалады. Поливалентті қан сарысуларының бір тобымен желімделген антигенді 1:10 қатынасында сұйылтылған сол топтың моновалентті қан сарысуларымен қайталап тексереді. Осында оң нәтиже көрсеткен антигенді шыны түтіктердегі АР-да 1 мл көлемінде қояды. Моновалентті қан сарысуын 1:25 сұйылтымынан бастап этикеткада көрсетілген титрге дейін сұйылтады. Әуелі бірінші шыны түтікте қан сарысуының бастапқы сұйылтымы дайындалады: 2,4 мл физиологиялық ерітіндіге 0,1 мл моновалентті қан сарысуы қосылады. Қалған шыны түтіктерге 0,5 мл- ден физиологиялық ерітінділер құйылады. Бірінші шыны түтіктегі (1:25) қан сарысуынан 0,5 мл алып, оны екінші шыны түтікке құйып, араластырғаннан кейін, оның 0,5 мл-і үшінші түтікке ауыстырылады, үшіншіден – төртіншіге солай т.б., соңғы шыны түтіктен 0,5 мл сұйықтықты, ал бірінші шыны түтіктен 1,5 мл-ді алып тастайды. Сосын барлық шыны түтіктерге 0,5 мл-ден зерттеуге алынған антиген қосылады. Қосымша бақылау қойылады: 1) антиген + физиологиялық ерітінді (жалған агглютинация болмау үшін); 2) 1:25 қатынасындағы қан сарысуы (флокуляцияның болмауы үшін). Барлық шыны түтіктерді шайқап, 37ºС-қа реттелген термостатта 16-18 сағат ұстайды, сонан соң бөлме температурасында 6-8 сағат қалдырады. Реакция нәтижесі агглютиноскоп көмегімен төрт кресттік баға бойынша оқылады. E. coli -дің жүктеу/скачать 6,39 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|