Биотехнология. Теория и практика. 2013, №4, стр. 42-49
DOI: 10.11134/btp.4.2013.6
4
Оптимизация режимов стерилизации апикальных меристем для введения в культуру in vitro
На начальном этапе клубни образцов картофеля предварительно промыли в мыльном растворе и
поместили в термостат для оздоровления от вирусной и грибной инфекции. Для этого в термостате
повышали температуру от +25°С до +37°С путем ежедневного увеличения на 2°С. После этого клубни
проращивали в фактеростатной комнате при температуре 37°С и 70% относительной влажности воздуха в
течение 3-х недель.
Проросшие ростки из глазков клубней использовали для введения в
культуру
in vitro
. Одним из важных
этапов введения в культуру
in vitro
апикальных меристем является стерилизация ростков. Для этого были
подобраны режимы стерилизации и стерилизующие агенты для регенерации апикальных меристем.
В результате исследований провели подбор режимов стерилизации апикальных меристем размером 3-5
мм образцов картофеля для введения в культуру
in vitro
. Для этого стерилизовали апикальные меристемы
сортов и форм в разных концентрациях дезинфицирующего раствора и времени экспозиции (табл. 1).
Показано, что из 8 вариантов стерилизующих растворов почти все обладали высокой эффективностью,
процент регенерации составил от 59,1±3,3 до 91,7±5,0. Наибольший процент выживших апикальных
меристем наблюдали при использовании 4 варианта (Белизна 20% с Tween, 10 мин) – 95,7%; 1
варианта
(Белизна 20% с Tween, 7 мин) – 91,7%. Наименьший процент регенерации 59,1 наблюдали на 8 варианте
(Белизна 100%, 10 мин). При высокой концентрации стерилизующего агента апикальные меристемы
темнели, наблюдали некротический ожог. В связи с этим в дальнейшем для стерилизации апикальных
меристем 100% Белизну не использовали.
При сравнении двух экспозиций времени 7 и 10
минут показано, что апикальные меристемы лучше
вводятся в культуру
in vitro
при 20%
Белизны с Tween, 10 минут, регенерация – 95,7%, по сравнению с 7
минут – 91,7%. Также использование 20% Белизны без Tween, 10 минут, снизило регенерацию на 14,9%
(80,8%).
При 70% Белизны с Tween, 10 минут, регенерация составила 79,8%, при этих же концентрациях
стерилизующего агента, время экспозиции 7 минут – 76,0%. Применение 70% Белизны без Tween, 10 минут,
уменьшило регенерацию на 9,4% (70,4%).
Достарыңызбен бөлісу: