Основные принципы систематики прокариот
жүктеу/скачать 457,65 Kb.
|
ответы к экзамену
- Бұл бет үшін навигация:
- ДНК-полимеразы
- Молекулярно-генетические методы исследования.
| Генная инженерия- раздел молекулярной генетики, представляющий собой совокупность методов и технологий для создания in vitro рекомбинантных молекул ДНК или РНК и способов их переноса. В результате клетки, получившие чужеродные гены, приобретают способность синтезировать белки, которые они ранее не синтезировали.
Цель: для переноса генной информации из одной клетки в другую, преодолевая даже межвидовые барьеры; для создания микроорганизмов-продуцентов ферментов, гормонов, вакцин, антигенных препаратов. Рекомбинантные молекулы содержат два компонента- вектор(переносчик) и клонируемую “чужеродную” ДНК. Этапы: Выделение или синтез ДНК из отличающихся друг от друга организмов или клеток Получение гибридных молекул ДНК Введение рекомбинантных молекул в живые клетки Создание условий для экспрессии и секреции продуктов, кодируемых генами ДНК-лигаза — фермент, который катализирует образование фосфодиэфирных связей между соседними нуклеотидами в молекуле ДНК. Связи образуются между С—С, С—S, С—О и С—N за счет энергии сопряженной реакции гидролиза. ДНК-полимеразы— ферменты, участвующие в синтезе ДНК. У Е. coli были выделены 3 типа ДНК-п.: pol I, pol II и pol III. Pol III –репликация ДНК в клетке бактерий. Два др. фермента - репарация ДНК. . Рестриктазы (своеобразные молекулярные ножницы), действуя на двухцепочечную ДНК, "узнают" в ней определенную последовательность нуклеотидов, прикрепляется к ней и разрезает ее в месте прикрепления. Вектор – это молекула ДНК, способная самостоятельно реплицироваться в клетках различных организмов и обеспечивать размножение (клонирование) и работу (экспрессию) встроенного в неё искусственно какого-либо гена. Векторами являются циркулярно замкнутые молекулы ДНК- плазмиды, умеренные бактериофаги или вирусы животных, иногда космиды (плазмиды с липкими концами, cos-сайтами ДНК бактериофага лямбда). Они должны обладать рядом свойств, в частности: - самостоятельно реплицироваться - нести в своем составе участки рестрикции - содержать маркеры фенотипа Идеальные векторы – плазмиды - небольшие кольцевые молекулы ДНК, самостоятельно живущие в цитоплазме бактерий. Плазмиды способны к автономной репликации, обладают генами устойчивости к различным антибиотикам, что позволяет легко обнаружить их присутствие в клетках, плазмиды могут внедряться в хромосому клетки хозяина, а также имеют участки ДНК (сайты рестрикции) для действия ряда рестриктаз. Это означает, что каждая такая рестриктаза может разрезать кольцо плазмидной ДНК и переводить её в линейное состояние. После чего линейную плазмиду можно легко соединить с фрагментом ДНК другого вида с подходящими липкими концами. Клонируемые молекулы ДНК - это фрагменты ДНК, имеющие определённые гены, кодирующие синтез нужного вещества. Их получают экстракцией натриевой ДНК, с помощью фермента обратной транскриптазы на молекуле и-РНК и синтезов генов химическим способом. Молекулярно-генетические методы исследования. жүктеу/скачать 457,65 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|