Основные принципы систематики прокариот
Методы выделения и культивирования вирусов
жүктеу/скачать 457,65 Kb.
|
ответы к экзамену
- Бұл бет үшін навигация:
- Вирусы культивируют
- Клеточная культура
- О наличии вируса
| 121.Методы выделения и культивирования вирусов.
Материалами для вирусологического исследования могут быть кровь, различные секреты и экскреты, биоптаты органов и тканей человека. Для выделения вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы, иногда лабораторных животных. Вирусы культивируют на биологических моделях: в организме лабораторных животных, в развивающихся куриных эмбрионах и культурах клеток (тканей). В основе тропизма вирусов лежит чувствительность к вирусу определенных клеток, а, следовательно, тканей и органов. Это свойство вирусов заражать лишь определенные клетки называется зависимым от хозяина ограничением. Клеточная культура– система клеток, получаемая из ткани, находящаяся в виде слоя клеток, прикрепленных к стеклу, или в виде суспензии. Наиболее практическое применение получили однослойные культуры первично-трипсинизированных и перевиваемых линий клеток. Сущность методов при приготовлении первичных культур тканей заключается в разрушении межклеточной ткани и разобщения клеток для последующего получения монослоя. Разобщение клеток проводится путём воздействияна ткань протеолитических ферментов (трипсина). Для культивирования культуры клеток применяют синтетические питательные среды – 199, Игла, Хенкса, Эрла (эти среды имеют аминокислоты, витамины, глюкозу, минеральные соли). Смена питательной среды проводится через 2-3 дня. первичные (трипсинизированные) культуры клеток – у которых межклеточные связи разрушают ферментами (трипсином, панкреатином) и получают монослой клеток на стекле. Перевиваемые (стабильные): а) нормальные (ПКБ – почки барана; СОЦ – сердце обезьяны циномольгус); б) опухолевые – Hela– рак шейки матки;Hep–1 – эпидермоидный рак гортани; Дейтройт 6 – костный мозг больного раком легкого. О наличии вирусав зараженной культуре клеток можно судить по цитопатическому действию (ЦПД) – патологические изменения морфологии клеток, вплоть до их гибели, возникающие в результате репродукции вирусов, и наблюдаемые под микроскопом: дегенерация клеток (округление, изменение формы, разрушение); появление включений (Липшются – вирус герпеса; Гварниери – вирус натуральной оспы) и телец (Бабеша-Негри – вирус бешенства); разрушение пласта клеток (парамиксовирусы); образование гигантских многоядерных клеток - симпластов (вирус кори). Образование «негативных колоний», или «бляшкообразование» – ограниченные участки разрушенных вирусами клеток в сплошном монослое культуре клеток. Они видны невооруженным глазом в виде светлых пятен на фоне окрашенного монослоя живых клеток. Добавление агара в питательную среду ограничивает распространение вирусов по всему монослою после выхода их из разрушенной клетки и обеспечивает взаимодействие вирусов только с соседними клетками. Каждая «бляшка» образуется потомством одного вириона. жүктеу/скачать 457,65 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|