Основные принципы систематики прокариот
Молекулярно-генетические методы
жүктеу/скачать 457,65 Kb.
|
ответы к экзамену
| Молекулярно-генетические методы- методы, позволяющие в генетических материалах обнаруживать фрагменты геномов.
Метод молекулярной гибридизации - для выявления степени сходства различных ДНК (при идентификации микроорганизмов проводят сравнение ДНК выделенного штамма с ДНК эталонного штамма). А. Исследуемую ДНК нагревают в щелочной среде для расплетения ее на две отдельные нити. Б. Одну из них закрепляют на специальном фильтре. В. Этот фильтр помещают в раствор, содержащий радиоактивный зонд (одноцепочечную молекулу ДНК эталонного штамма, меченную радиоактивным изотопом). Г. Затем температуру реакционной смеси понижают, чтобы создать условия для восстановления двухцепочечной структуры ДНК. Д. В случае, если исследуемая ДНК и ДНК эталонного штамма относятся к одному виду – в реакционной смеси формируется двухцепочечная ДНК. При отрицательной реакции двухцепочечная ДНК не формируется. реакцию оценивают по степени гомологии – проценту восстановленных связей между двумя цепочками ДНК. Молекулярные зонды - это короткие фрагменты ДНК, подходящие определённому организму, которые посредством определенных лабораторных методов могут использоваться, чтобы указать не только присутствие или отсутствие этого организма, но также и его относительные количества. Для получения ДНК-зондов используют метод клонирования генов. Сущность метода состоит в том, что фрагмент ДНК, соответствующий какому-либо гену или участку гена, встраивают в клонирующую частицу, как правило, бактериальную плазмиду (кольцевая внехромосомная ДНК, присутствующая в клетках бактерий и несущая гены устойчивости к антибиотикам), и затем бактерии, имеющие плазмиду со встроенным человеческим геном, размножают. Благодаря процессам синтеза в плазмиде удаётся получить миллиарды копий человеческого гена или его участка. В дальнейшем полученные копии ДНК, меченные радиоактивной меткой или флюорохромами, используют в качестве зондов для поиска комплементарных последовательностей среди исследуемого пула молекул ДНК. жүктеу/скачать 457,65 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|