Радиоиммунологический метод, или анализ (РИА)
Высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген—антитело с примене-
нием антигенов или антител, меченных радионуклидом
(
I25
J,
14
C,
3
Н,
51
Сг и др.). После их
взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его
радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение): интенсивность
излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.
При
твердофазном варианте РИА
один из компонентов реакции (антиген или антитела)
сорбирован на твердом носителе, например в лунках микропанелей из полистирола. Другой
вариант метода —
конкурентный РИА:
искомый антиген и меченный радионуклидом антиген
конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной
11
сыворотки. Этот вариант используют для определения количества антигена в исследуемом
материале.
РИА применяют
для выявления антигенов микробов, определения гормонов,
ферментов, лекарственных веществ и иммуноглобулинов, а также иных веществ,
содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях — 10"
12
—10"
15
г/л. Метод представляет определенную экологическую опасность.
Иммуноблоттинг
Иммуноблоттинг (ИБ) — высокочувствительный метод, основанный на
сочетании электрофореза и ИФА или РИА.
Антиген выделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле,
затем переносят его (блоттинг — от англ. blot, пятно) из геля на
активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с
помощью ИФА.
Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигенов. На эти
полоски наносят сыворотку больного. Затем после инкубации отмывают от
несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов
человека, меченную ферментом.
Образовавшийся на полоске комплекс антиген +
антитело больного + антитело против Ig человека выявляют добавлением
субстрата/хромогена, изменяющего окраску под действием фермента
ИБ используют
как диагностический метод при ВИЧ-инфекции и др.
