Лекции по фитопатологии учебное пособие для аспирантов сельскохозяйственного направления
Диагностика бактериальных болезней
жүктеу/скачать 1,13 Mb. Pdf көрінісі
|
3 3
| 5. Диагностика бактериальных болезней.
Для диагностики бактерио- зов используют следующие методы. • Визуальныйанализ симптомов . Точно определить заболевание на ос- новании симптомов можно лишь в редких случаях, когда симптомы носят специфический характер. На бактериальную природу некрозов часто указы- вает наличие экссудата. Для стимулирования его проявления пораженные ча- сти растений помещают во влажную камеру. • Микроскопический с использованием окрашивания . Микроскопиче- ский препарат готовят из пораженной ткани растения, для чего используют 39 пограничные участки между пораженной и здоровой тканью. Проведение окрашивания (например, по Граму) облегчает распознавание бактериальных клеток в ткани растения-хозяина. • Микробиологический . Заключается в изоляции возбудителя из пораженных тканей на искусственные питательные среды. При этом необходимо установить патогенность изолятов бактерий, то есть их способность вызывать на искусствен- но инфицированных растениях те же симптомы, какие были на исследуемом рас- тении при естественном поражении. При этом действуют в соответствии с прави- лом Роберта Коха, названным триадой Коха. Метод включает три основных этапа: выделение возбудителя, заражение растения и снова выделение возбудителя. • Серологический . Сущность метода такая же, как при диагностике ви- русов. Сложность серологической диагностики бактерий состоит в том, что у бактериальной клетки имеются белки, не только специфичные для вида, но и общие для рода и семейства бактерий. Поэтому для получения специфичной антисыворотки используют лишь видоспецифичные белки (антигены). Наиболее часто применяют такие серологические методы, как иммунофер- ментный анализ и реакцию иммунофлуоресценции. • Молекулярный . Среди нескольких диагностических методов, в которых используется полиморфизм молекулы ДНК бактерий, наиболее распространен метод амплификации (умножения) видоспецифичных последовательностей ДНК при полимеразной цепной реакции (ПЦР). В ходе этой реакции фрагмен- ты ДНК, характерные только для одного вида бактерии, избирательно синте- зируются ферментом полимеразой до количества, в тысячи и миллионы раз превышающего исходное число копий выбранного фрагмента ДНК. Далее фрагмент обнаруживают с помощью электрофореза в агарозном геле или по флуоресценции исходного раствора. Метод отличается высокой чувствитель- ностью (теоретически достаточно 1 копии бактериальной ДНК), быстротой (до 2...3 ч), высокой надежностью. К недостаткам метода относят высокую стои- мость реактивов и оборудования для проведения ПЦР, а также необходимость предварительного изучения разнообразия ДНК фитопатогенных бактерий. жүктеу/скачать 1,13 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|