ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА Р а б о т а №1 Цель: Освоить вирусологический метод диагностики полиомиелита.
Задача. У больного К., 12 лет, с клиническим диагнозом «Полиомиелит» взяты на
исследование фекалии. Для выделения чистой культуры вируса был произведен посев на
культуру клеток в среде 199. После выделения чистой культуры осуществлена идентифи-
кация вируса в реакции нейтрализации бляшкообразования. Используя готовые демонст-
рации, оценить результаты, оформить протокол. Сделать вывод.
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я В однослойную культуру клеток вносят исследуемый материал. Покачивая, равно-
мерно распределяют материал и помещают в термостат при температуре 37°С на 1,5 часа
для адсорбции. На культуру клеток наносят питательный агар, через 1 час после затверде-
вания агара посев помещают в термостат при 36-37°С. Учет результатов после 2-4 дней
инкубации по образованию бляшек – участков разрушенных вирусом клеток.
Для идентификации выделенного вируса смешивают равные объемы разведения ви-
руса и соответствующих разведений иммунной сыворотки, смесь инкубируют в течение
30 минут при комнатной температуре. Смесь и контроль (вирус без сыворотки) вводят в
однослойную культуру клеток, затем покрывают агаром. Учет проводят по сравнению
числа бляшек в опыте и контроле. Реакция считается положительной при снижении числа
бляшек в опыте, по сравнению с контролем – принцип нейтрализации.
ПРОТОКОЛ
Цель: Исследуемый
материал
Выделение вируса
Идентификация вируса
Опыт
Контроль
Иммунные
сыворотки к
полиовирусам
типа:
Разведения сыворотки
1:10
1:20
1:30
1:40
К
Рисунок Рисунок
I
II
Вывод: (Ответить на вопросы: 1. С какой целью исследовались фекалии больного? 2. Обнаружен ли вирус в культуре ткани? 3. Каким способом обнаруживается вирус? 4. Какая реакция и какой метод ее учета использованы при идентификации вируса? 5. За- кончено ли исследование?).