4-зертханалық жұмыс Тақырып

2. Жасушаның өміршеңдігін және суспензия культураларының агрегация дәрежесін анықтау.

3. Фитохормондардың темекі клеткалары культурасындағы морфогенез бағытына әсері

1.Суспензия культурасын алу және субкультурация. Суспензия культуралары борпылдақ каллустық тіннен алынады, оны каллустық құрамдағы сұйық қоректік ортаға салып, шайқалатын орында өсіреді (100-120 айн / мин). Аз агрегатка оңай ыдырайтын, өміршең, қарқынды түрде дамитын каллус культурасын қолдану ұсынылады.

Жасушаның көбеюін қамтамасыз ететін инокуляттың максималды мөлшері (суспензия жасушаның критикалық концентрациясы) суспензияның жалпы көлемінің 10-20% құрайды. Инокуляттың жоғарылауы оттегінің жетіспеушілігі және қоршаған ортаға улы метаболикалық өнімдердің жиналуынан жасуша популяциясының тұншығуына әкеледі.Ол алынған өсімдік түріне, ортаның құрамына, тербелетін орынның айналу жылдамдығына байланысты алғашқы суспензия өсу циклінің ұзақтығы әдетте тең болады 15-20 күн. Осы уақыт ішінде жасушалардың бір бөлігі өледі, каллустың бөлінуі және тірі жасушалардың қарқынды бөлінуі орын алады. Кейінгі циклдар 2 аптаға дейін қысқарады. Суспензияны колбаның қабырғаларында тірі жасуша тобы пайда болғаннан кейін трансплантациялау керек.

Жұмыс барысы: Жұмыс асептикалық жағдайда жүзеге асырылады. Алғашқы каллус ұлпа суспензиясын МС сұйық ортаға суытылған қалақпен ауыстыру керек, 50-100 мл ортаға 3-5 г ұлпа. Тек қана жас, белсенді өсіп келе жатқан, ашық түсті каллусты пайдалану керек. Суспензия көлемі колба көлемінің 10-20% құрайды (мысалы, көлемі 500 мл колбаға 50-100 мл орта құйылады).

Каллусты салғаннан кейін колбаны фольга қақпағымен, ал үстіне целлофанмен немесе қағазбен жабыңыз. Белгісін қойып, температурасы 24,5 ºС болатын термостатта қозғалу жылдамдығы 120 айн / мин айналатын качалкаға салыңыз. Егер алғашқы бірнеше күн ішінде орта бұлыңғыр болса, бұл егу уақытындағы бактериялық инфекцияның белгісі.

Суспензияны қайта өңдеу келесі жолдардың бірімен жүзеге асырылуы мүмкін:

1. Суспензияны 1-2 минут күте тұрыңыз, сонда үлкен агрегаттар шөгеді, жаңа қоректік орта бар колбаға 5-10 мл құйыңыз.

2. Суспензияны 1-2 минутқа қойыңыз. Стерильді пипетка көмегімен оның көлемінің жоғарғы бөлігінен бірнеше миллилитр суспензияны алып, жаңа қоректік ортасы бар колбаға салыңыз.

  3. Суспензияны пора диаметрі 500 мкм нейлоннан жасалған сүзгі арқылы електен өткізіңіз.Жасушалар тұндырылғаннан кейін, қалған сұйықты ағызып, суспензияға жаңа қоректік ортаны қосыңыз.

Суспензияны жоғарыда аталған әдістердің бірін қолданып трансплантациялағаннан кейін, колбаның мойнын қыздырып, оны алдын ала қыздырылғын фольгамен жауып, үстіне қағаз немесе целлофанмен жауып, колбаны келесі трансплантацияға дейін качалкаға қоясыз.