4-зертханалық жұмыс Тақырып
жүктеу/скачать 23,34 Kb.
|
Биотехнология 4-зертхана
- Бұл бет үшін навигация:
- 2.Жасушаның өміршеңдігін және суспензия культураларын біріктіру дәрежесін бағалау.
| Бақылау сұрақтары.
1. Суспензия культураларын алудың негізгі әдістері қандай? 2. Өсімдік жасушаларының суспензиялы культураларын алу үшін каллустық тіндерге қандай талаптар қойылады? 3. Суспензия культураларының орташа өсу циклі қандай? 4. Жасушалық суспензиялардың субкультуралары қалай жүзеге асырылады? 2.Жасушаның өміршеңдігін және суспензия культураларын біріктіру дәрежесін бағалау. Суспензиямен жұмыс кезінде оның өміршеңдігін ескеру қажет. Жасушаның өміршеңдігін цитоплазманың қозғалуымен, жасуша қабырғасының бояғыштарға өткізгіштігі дәрежесімен, ферменттердің белсенділігімен және т.б. Метилен көк сияқты бояулар жасушаларды өлтірмейді және тірі жасушалардың қабықшалары арқылы цитоплазмаға енбейді. Егер суспензия жасушаларының 70% -дан көбі көк түспен боялмаса, өміршең болып саналады; агрегат жасушаларының 50% -дан астамы боялмаса өміршең болады. Бейтарап қызыл түс көмегімен жасушаның өміршеңдігін анықтаған кезде, тірі жасушалардың қызғылт түске боялуы байқалады. Бұл жағдайда өлі жасушалар ортаның өңіне ұқсас қызғылт түсті болады, оған аз мөлшерде әлсіз сілтілі ерітінді қосылады. Суспензияның өміршеңдігін анықтау үшін жасуша метаболизміне қатысатын заттар қолданылады: флуоресцеиндиацетат жасушада флуоресцеин түзу цитоплазмасына флуоресценцияны беретін эстразаларға ыдырайды. Эстеразаның белсенділігі спектрофотометрде анықталады. Тетразол тұздарымен жасушаларды бояу жасушаның тыныс алу жылдамдығын анықтауға мүмкіндік береді. Зерттеу мақсаттарына байланысты өсіру шарттары мен қоректік ортаның құрамы суспензияда жасушалардың белгілі бір бөлігі басым болатындай етіп таңдалады. Әдетте суспензия 4 негізгі фракцияға бөлінеді: дара жасушалар, ұсақ агрегаттар, орта агрегаттар, ірі агрегаттар. Агрегаттау дәрежесі микроскоптың кішкентай үлкейткішімен препараттардағы бірнеше көздердегі жасушаларды санау арқылы анықталады (кемінде 1000 жасуша). жүктеу/скачать 23,34 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|