Дәріс №13 Қарастырылатын сұрақтар

жүктеу/скачать 3,06 Mb.

бет	3/4
Дата	20.12.2023
өлшемі	3,06 Mb.
	#198201

1 2 3 4

Байланысты:
ДНК секвенирование (2)

Максам-Гилберт бойынша секвенирлеу

Сэнгер әдісі
«плюс-минус» әдісі

Қажетті материалдар:

ДНҚ үлгісі;
ДНҚ полимеразасы;
олигонуклеотидті праймерлер;
төрт дезоксинуклеотидтердің (dNTPs) қоспасы (A, T, G және C)

Әрі қарай күшейтілген фрагменттердің қоспасын реакцияға түспеген дезоксинуклеозид трифосфаттардан тазарту керек. Қоспа сегіз тең бөлікке бөлінеді.
«Плюс» - жүйеде дезоксинуклеозид трифосфаттарының төрт түрінің әрқайсысының қатысуымен төрт ПТР реакциясы жүргізіледі;
«Минус» - жүйеде параллель олардың әрқайсысы болмаған кезде төрт ПТР реакциясы жүргізіледі.
Әрі қарай, нәтижелер электрофорезнемесе радиоавтография арқылы бейнеленеді және ДНҚ тізбегін анықтайды,
«плюс» жүйесінде ПТР-ны тоқтату (тоқтату) белгілі бір dNTP-ден кейін, ал «минус» жүйесінде оның алдында болады.
Сэнгер ДНҚ секвенирлеу: «Терминаторлар» әдісі

Бірнеше жылдан кейін Сэнгер әріптестерімен бірге «Терминаторлар» әдісі немесе «тізбекті бұзу» әдісі деп аталатын секвенирлеудің тағы бір әдісін ұсынды. Бұл әдістің мәні мынада: әдеттегі нуклеотидтердің аналогтары (дидеоксинуклеозидтрифосфаттар) реакциялық қоспаға қосылады, олардың синтезделген тізбекке қосылуы оны одан әрі синтездеуінің тоқтауына (терминация) әкеледі, ал алынған «кесек» бойынша реттелген ДНҚ фрагментінің соңғы әрпін орнатуға болады
Максам-Гилберт бойынша секвенирлеу
Бұл әдіс Сенгер әдісіне (тізбекті терминациялау) балама болып ұсынылды.
Maxam-Gilbert әдісінің негізгі қадамдары:

ДНҚ-ның соңғы ұштарын белгілеу;
ДНҚ-ны химиялық реагенттермен өңдеу; Таңбаланған сынамалардың әрқайсысы жеке нуклеотидтерге тән химиялық реагенттермен өңделеді. Бұл реактивтер белгілі бір нуклеотидтер орналасқан жерлерде ДНҚ-да үзілістер тудырады.
Электрофорез;
Визуализация және интерпретация;
Реттілікті анықтау.

жүктеу/скачать 3,06 Mb.

Достарыңызбен бөлісу:

1 2 3 4