Дәріс №13 Қарастырылатын сұрақтар

жүктеу/скачать 3,06 Mb. бет 1/4 Дата 20.12.2023 өлшемі 3,06 Mb. #198201

Бұл бет үшін навигация:

• Қарастырылатын сұрақтар: ДНҚ химиялық синтезі Полимеразды тізбекті реакция (ПТР) ДНҚ секвенирлеу әдістері Кілт сөздер
• Қорғаныс топтары
• Реактивтер және реакциялық жағдайлар
• Тазалық пен сапаны бақылау

Қ. Жұбанов атындағы Ақтөбе өңірлік университеті Жаратылыстану факультеті Биология кафедрасы ДНҚ синтезі, секвенирлеу және амплификациясы Калбаева Перизат Азатқызы 7М01505-Биология мамандығының 2 курс магистранты Дәріс №13 Қарастырылатын сұрақтар: ДНҚ химиялық синтезі Полимеразды тізбекті реакция (ПТР) ДНҚ секвенирлеу әдістері Кілт сөздер: нуклеин қышқылдары, химиялық синтез, ДНҚ синтезатор, амплификация, ПТР, секвенирлеу, dNTPs, Сэнгер әдісі, Максам-Гилберт әдісі, жаға заман секвенирлеу әдістері Нулеин қышқылдарының химиялық синтезі – берілген химиялық құрылымы (реттілігі) бар салыстырмалы түрде қысқа нуклеин қышқылының фрагменттерінің химиялық синтезі. Бұл әдіс заманауи зертханалық тәжірибеде олигонуклеотидтерді қажетті дәйектілікпен тез және арзан түрде алу үшін қолданылады. Олигонуклеотидтерді синтездеудің ең кең тараған әдісі амидофосфиттерді — дезоксирибонуклеозидтердің (dA, dC, dG, T) немесе рибонуклеозидтердің (A, C, G, U) реактивті туындылары болып табылатын және сәйкесінше ДНҚ мен РНҚ-ның қысқа фрагменттерін синтездеуге мүмкіндік беретін құрылымдық блоктарын қолдануға негізделген. Амидофосфит әдісімен ДНҚ синтезі - нуклеотидтер арасындағы фосфодиэфирлік байланыстарды қалыптастыру үшін амидофосфит реагенттерін пайдаланатын химиялық синтез әдісі. Бұл әдіс қазіргі синтетикалық биологиядағы ең кең таралған және тиімді әдістердің бірі болып табылады. Осы процестің негізгі қадамдарын қарастырайық: Тірек материалын (саппорт) дайындау Саппорт функционализациясы Бірінші нуклеотидті қосу Келесі нуклеотидті белсендіру және қосу Циклды қайталау Синтездің аяқталуы және бөлшектеу (деташирование) Тазалау және талдау Амидофосфит әдісімен ДНҚ синтездеу процесі бірнеше негізгі аспекттерді қамтиды: Қорғаныс топтары: ДНҚ синтезі процесі нуклеотидтердің қажетсіз өзара әрекеттесуін болдырмау үшін қорғаныс топтарын пайдаланады. Әдетте 5'-гидроксил тобы және 3'-фосфат тобы уақытша химиялық топтармен қорғалады. Реактивтер және реакциялық жағдайлар: Амидофосфит әдісі нуклеотидтің 5'фосфат тобын белсендіру және фосфодиэфирлік байланыстардың түзілуін қамтамасыз ету үшін амидофосфиттер сияқты арнайы химиялық реагенттерді пайдаланады. Тазалық пен сапаны бақылау: синтезделген ДНҚ тазалығын бақылау. Тізбектің ұзындығын анықтау және қоспалардың бар-жоғын тексеру үшін хроматография және электрофорез сияқты талдау әдістерін қолдануға болады. Қазіргі зертханалар синтез процесін жеңілдететін және жеделдететін автоматтандырылған ДНҚ синтезаторларын жиі пайдаланады. Олар бірнеше олигонуклеотидтерді параллель синтездеуге мүмкіндік береді. ДНҚ амплификация - бұл үлгідегі ДНҚ молекулаларының санын көбейту әдісі, бұл оның мөлшерін әртүрлі талдаулар жүргізуге жеткілікті етеді. ДНҚ амплификация кең таралған әдістерінің бірі - полимеразды тізбекті реакция (ПТР). Процестің негізгі қадамдары: жүктеу/скачать 3,06 Mb. Достарыңызбен бөлісу: