Приложение 9 (обязательное) Метод определения общих колиформных бактерий в сточных водах

Приложение 9 (обязательное)

Метод определения общих колиформных бактерий в сточных водах

К общим колиформным бактериям (ОКБ) относят грамотрицательные не образующие спор палочки, не обладающие оксидазной активностью, способные расти на дифференциальных лактозных средах (типа Эндо), ферментирующие лактозу до образования альдегида, кислоты и газа при температуре 37 °С в течение 24 часов. Общие колиформные бактерии определяют методом прямого посева на среду Эндо точно отмеренных объёмов воды и методом мембранной фильтрации с последующим выращиванием посева при температуре 37 °С в течение 18-24 часов и подсчётом образующих альдегид колоний.

Определение ОКБ титрационным методом не рекомендуется вследствие низкой точности получаемых результатов, большого объёма работы при 2 или 3 рядовом посеве.

Условия отбора пробы, транспортировки и хранения, подготовка посуды, питательных сред, приготовление разведений должны соответствовать методическим указаниям по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоёмов и питьевой воды.
2. Выполнение анализа

2.1. Готовят ряд десятикратных разведений пробы сточной воды.

Объёмы для посева и число разведений устанавливают в каждом конкретном случае исходя из предполагаемого уровня загрязнения с таким расчётом, чтобы получить на чашках изолированные колонии ОКБ в количестве, при котором имеет место минимальная ошибка метода - от 10 до 50 КОЕ на чашку.

2.2. Из каждого выбранного разведения делают посев параллельно на две чашки Эндо, предварительно подсушенные, внося по 0,5 мл или по 0,1 мл на каждую из двух чашек. При посеве 0,5 мл внесённый объём распределяют по всей поверхности чашки покачиванием или стеклянным шпателем, после чего подсушивают. При отсутствии специального аппарата для подсушивания, чашки с посевами помещают приоткрытыми в термостат до полного испарения воды, после чего переворачивают вверх дном. При посеве 0,1 мл посевы растирают шпателем до полного впитывания воды, переворачивают вверх дном и ставят в термостат.

2.3. При исследовании обеззараженной воды, когда допустимое содержание ОКБ в стоках не более 100 КОЕ/100 мл используют один из двух методов: прямого посева или мембранной фильтрации по МУ 2285-81. Прямым посевом делают высев на 4 чашки по 0,5 мл из неразведённой пробы воды. Через мембранный фильтр профильтровывают 1 мл, 2,5 мл и 5 мл.

При контроле обеззараженных стоков, когда норматив не более 10 КОЕ/100 мл ОКБ, работают методом мембранной фильтрации и профильтровывают 10 мл, 25 мл и 50 мл исследуемой воды. Фильтры помещают на среду Эндо.

2.4. Посевы инкубируют 24 (± 2) часа при температуре 37 (± 1) °С.

Приготовление реактива и техника выполнения реакции по МУК 10.05.045.03.

Допускается учёт результата, но с отметкой в протоколе:

если на чашках выросли менее 10 или более 50 колоний;

если на одной чашке сливной рост, подсчёт выполнен на другой чашке из этого разведения.

При подсчёте результата ОКБ в обеззараженной воде суммируют все колонии ОКБ, выросшие на чашках или фильтрах, где получены изолированные колонии, и вычисляют результат по формуле:

Х = (а×100):V,

где Х - число ОКБ в 100 мл;

а - число подсчитанных колоний ОКБ в сумме;

V - посеянный объём воды на чашки или фильтры, в которых вёлся подсчёт колоний.

При этом объём, где нет роста колоний, так же учитывают.