Лекция 1 Тема: Понятие о программируемой гибели клеток. Новый взгляд на классификацию пкг


клеток – красным (бромид этидия ).  Флуоресцентный метод анализа клеточного цикла



Pdf көрінісі
бет9/84
Дата09.10.2022
өлшемі3,24 Mb.
#152321
түріЛекция
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   ...   84
Байланысты:
Апоптоз Абрамова магистры лекции

клеток
– красным (бромид этидия
). 
Флуоресцентный метод анализа клеточного цикла. 
Арест роста клеток также является частым ответом клеток на токсическое воздействие. 
Фиксация клеток с последующей окраской флуорофором, интеркалирующим в ДНК (например, 
PI), позволяет оценить относительное количество клеток на разных стадиях клеточного цикла. 
Метод также выявяет клетки с фрагментированной ДНК, т.е. апоптотические клетки.


На рис. 5 (левая панель) отчётливо видны пики, соответствующие клеткам с одинарным (N1) и 
двойным (N2) набором хромосом. Такая картина характерна для быстроделящихся клеток. После 
обработки клеток Актиномицином D, происходит «арест» клеток в S-фазе и соответственно 
снижается пик N2, а также появляются апоптотические клетки с фрагментированной ДНК. 
Рис. 5. Анализ клеточного цикла методом проточной цитометрии по 
флуоресценции иодида пропидия. Линия 
клеток
Jurkat (T-лимфоциты мыши) до обработки (слева) и после обработки 
(справа) Актиномицином D. N1 и N2 – популяции 
клеток
с одинарным и двойным набором хромосом 
соответственно; популяция между пиками N1 и N2 соответствует кеткам, находящимся на стадии S-фазы; fragmented 
DNA – апоптотические клетки, в которых ДНК была фрагментирована и частично отмыта в процессе приготовления 
препарата

Флуоресцентный метод анализа апоптоза (запрограммированной смерти) по связыванию 
Аннексина V. 
Для оценки колическтва живых, апоптотических и некротических (или, так называемых, 
поздних апоптотических) клеток мы используем метод основанный на двойном флуоресцентном 
окрашивании клеток Аннексином V-FITC и PI. Аннексин V специфично и с высокой афинностью 
связывается с фосфатидилсерином, который появляется на поверхности апоптотических и 
некротических клеток; PI проникает только в клетки с повреждённой мембраной. Апоптотические 
клетки окрашиваются только аннексином V, поскольку они сохраняют целостность мембраны на 
ранних стадиях апоптоза, в то время как некротические клетки окрашиваются и обоим реагентами 
(рис. 6). 
Рис. 6. Анализапоптотических клеток окрашенных коньюгатом Annexin V-
FITC и Propidium Iodine, методом проточной цитометрии. Клетки линии HL-60 инкубировали в отсутствие (слева) и в 
присутствии хлорноватистой кислоты, 500 µM, (справа) в течение суток. Annexin V/PI -/- – живые клетки; Annexin 
V/PI +/- – апоптотические клетки; Annexin V/PI +/+ – некротические клетки



Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   ...   84




©engime.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет