Методы диагностики форм патологии с изменением в геноме

Методы диагностики форм патологии с изменением в геноме

Основные методы диагностики наследственных форм патологии и методы изучения их патогенеза приведены на рис. 4–17.

Клинико‑синдромологический метод: позволяет выявлять морфологические, биохимические и функциональные признаки наследственных форм патологии (например, дефицит плазменного фактора VIII при подозрении на гемофилию A; кариотип 45,Х0 при подозрении на синдром Шерешевского–Тёрнера; поражения скелета, ССС и глаз при подозрении на синдром Марфана).

Клинико‑генеалогический метод: выявляет патологические признаки и прослеживает особенности их передачи в поколениях при составлении родословной. Цель этого метода – установить закономерности наследования признака: определить тип наследования (доминантного, рецессивного, ауто‑ или гоносомного); – выявить носителей гена, вызывающего развитие болезни); – оценить пенетрантность (частоты проявления) гена ; – определить генетический риск (вероятность рождения больного ребёнка).

Близнецовый метод: основан на сравнительном анализе частоты определённого признака в разных группах близнецов, а также в сопоставлении с партнёрами монозиготных пар между собой и общей популяцией. Идентичность близнецов по анализируемому признаку обозначают как конкордантность, а отличие как дискордантность. Роль наследственности и факторов среды в возникновении патологии у близнецов оценивают по специальным формулам.

Цитогенетическая диагностика: основана на микроскопическом изучении хромосом с целью выявления структурных нарушений в хромосомном наборе (кариотипирование). В качестве материала используют тканевые культуры с большим числом делящихся клеток, чаще лимфоциты периферической крови. Хромосомы на стадии метафазы изучают при помощи специальных методов окрашивания и составляют идиограммы (систематизированные кариотипы с расположением хромосом от наибольшей к наименьшей), что позволяет выявлять геномные и хромосомные мутации.

Биохимическая диагностика: базируется на изучении биохимических показателей, отражающих существо болезни (например, активность ферментов, наличие патологических метаболитов, концентрация компонентов ферментативной реакции).

Объектами исследования являются метаболиты биологических жидкостей и клеток (например, фенилаланин при фенилпировиноградной олигофрении; кетоновые тела (КТ) при сахарном диабете), аномальные белки (например, Hb при гемоглобинопатиях), дефектные ферменты (например, холинэстераза, глутатион пероксидаза, каталаза).

При помощи методов молекулярной ДНК‑диагностики устанавливают последовательность расположения отдельных нуклеотидов, выделяют гены и их фрагменты, устанавливают их наличие в изучаемых клетках. К числу наиболее эффективных методов относятся гибридизация ДНК (блоттинг, in situ и т.д.), клонирование ДНК, полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Гибридизация ДНК применяется для определения порядка расположения нуклеотидов в исследуемом генетическом материале.

Блот – гибридизация используется для выявления интересующих (в том числе мутантных) генов.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) (специфическую амплификацию небольшого участка ДНК) применяют для изучения мест предполагаемых мутаций и других особенностей структуры ДНК. Для исследования можно использовать любой биологический материал, содержащий ДНК (например, кусочек ткани, каплю или пятно крови, смыв полости рта, луковицу корня волос).

Биологическое моделирование: проводят для анализа возможных генетических дефектов человека с использованием в качестве объекта исследования животных (здоровых или мутантных), а также для изучения возможных мутагенных и тератогенных эффектов ЛС и других агентов, для разработки методов генной инженерии.