Лекция 1 Тема: Понятие о программируемой гибели клеток. Новый взгляд на классификацию пкг


всеми силами стремится реализовать свою зловещую программу



Pdf көрінісі
бет8/84
Дата09.10.2022
өлшемі3,24 Mb.
#152321
түріЛекция
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   ...   84
Байланысты:
Апоптоз Абрамова магистры лекции

всеми силами стремится реализовать свою зловещую программу 
феноптоз
а

Однако уже синтезирован препарат, позволяющий в 1000 раз повысить 
антиоксидантный запас митохондрий - это катионный антиоксидант, который накапливается по 
электрическому полю внутри митохондрии. Такую дозу противоядия органелла вряд ли сможет 
преодолеть. Первые этапы проверки гипотезы уже осуществлены и дали положительные 
результаты. 
3.Маркеры и методы определения апоптоза. 
Флуоресцентный метод анализа выживаемости клеток с двойным окрашиванием. 
Существует ряд более дорогостоящих, но эффективных подходов, позволяющих 
дискриминировать живые и мёртвые клетки. Они основаны на одновременном окрашивании 
клеток
несколькими флуорофорами. В одном из таких методов используются бромид этидия и 
кальцеин АМ. Отрицательно заряженный бромид этидия, подобно PI, проникает только в клетки с 
повреждённой мембраной, интеркалирует в ДНК и флуоресцирует в красной области. Кальцеин 
АМ (ацетооксиметиловый эфир кальцеина), напротив, свободно проникает через плазматическую 
мембрану и в результате гидролиза клеточными эстеразами превращается в полианион кальцеин, 
который обладает флуоресценцией в зелёной области и удерживается в клетках с целостной 
мембраной (живых клетках) благодаря своему заряду. Анализ окрашенных 
клеток
можно 
проводить как методом проточной цитометрии (рис. 3), так и методом флуоресцентной 
микроскопии (рис 4).
Рис. 3. Анализ выживаемости клеток HL-60 методом проточной цитометрии по 
флуоресценции бромида этидия и кальцеина. Клетки инкубировали в отсутствие (А) и в присутствии хлорноватистой 
кислоты, 500 µM, (Б) в течение суток. Двумерное распределение 
клеток
по флуоресценции в 1-ом канале (по 
горизонтали, нм, кальцеин) и в 4-ом канале (по вертикали, нм, бромид этидия) позволяет оценить количество живых и 
некротических
клеток

Рис. 4. Флуоресцентная микрофотография клеток линии HeLa, окрашенных бромидом этидия 
и кальцеином AM. Клетки инкубировали в отсутствие (слева) и в присутствии перекиси водорода, 500 µM, (справа) в 
течение 2-х часов. Живые клетки окрашены зелёным (кальцеин), ядра мёртвых 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   ...   84




©engime.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет