Конспект подготовлен студентами, не проходил проф. Редактуру и может содержать ошибки. Следите за обновлениями на vk. Com/teachinmsu
ИММУНОЛОГИЯ НЕДОСПАСОВ СЕРГЕЙ АРТУРОВИЧ КУПРАШ ДМИТРИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ
жүктеу/скачать 1,18 Mb. Pdf көрінісі
|
immunology-M
- Бұл бет үшін навигация:
- ЛЕКЦИЯ №6. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА И СЕЛЕКЦИЯ ЛИМФОЦИТОВ
| ИММУНОЛОГИЯ
НЕДОСПАСОВ СЕРГЕЙ АРТУРОВИЧ КУПРАШ ДМИТРИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ КОНСПЕКТ ПОДГОТОВЛЕН СТУДЕНТАМИ, НЕ ПРОХОДИЛ ПРОФ РЕДАКТУРУ И МОЖЕТ СОДЕРЖАТЬ ОШИБКИ СЛЕДИТЕ ЗА ОБНОВЛЕНИЯМИ НА VK.COM/TEACHINMSU 45 ЛЕКЦИЯ №6. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА И СЕЛЕКЦИЯ ЛИМФОЦИТОВ Иммунологические методы Гибридомная технология позволяет получить моноклональные антитела, с высокой аффинностью узнающие определенный антиген. После иммунизации забираем плазматические клетки, производящие антитела. Сливаем их с раковыми клетками, которые происходят из плазматических клеток, но не производят антител. Такой гибрид может расти в культуре, будет производить антитела моно - специфичности. У мыши плазматических клеток много, не все производят то, что надо. Приходится клонировать, проводить скрининг. Слияние плазматических клеток, производящих специфические антитела, с бессмертными раковыми клетками, позволяет получить культуру клеток, производящих моноклональные антитела к нужному антигену. Иммуноглобулин - связывающие белки, блокирующие нормальную опсонизацию. При нормальной опсонизации антитела связывают эпитопы на поверхности бактерий и распознаются Fc - рецепторами фагоцитов. Белок А золотистого стафилококка связывает антитела "задом наперед" и препятствует в/д с Fc - рецепторами. Фагоцитоза не происходит. Способность белков А и G взаимодействовать с широким спектром Fc - фрагментов антител делает их ценными реагентами, которые будет доставать антитела из любой смеси. Иммунопреципитация хроматина. На клетки наливаем формальдегид, который сшивает амино - и имино - группы в радиусе 0,2 нм (2 Ангстрем) . Все белки, нуклеиновые кислоты, которые рядом, будут ковалентно сшиты. Выделяем ДНК, дробим, проводим манипуляции, на выходе, после секвенирования, узнаём, на каких участках генома сидели какие ТФ, модифицированные гистоны, РНК - полимераза 2. Далее с помощью биоинформатических методов изучаем/предсказываем, где находятся регуляторные элементы, транскрибируемые гены и т.п. Ключевой момент - шарики с белком А, которые захватывают антитела из смеси. Антитела моноклональные, которые узнают нужный белок. На выходе обогащаемся голубым белком, к которому были антитела. Проточная цитофлуориметрия и сортировка клеток. Берем моноклональные антитела к нескольким интересующим молекулам. Каждый моноклон метится своей молекулой, которая при облучении лазером будет испускать свет определённой длины волны. Осветив каждую клетку, можем измерить силу флуоресценции, это будет соответствовать количеству антител, которое связалось, т.е. с количеством молекул, которое нас интересовало. Добавление к клеткам смеси моноклональных антител с флуорофорами позволяет количественно "пометить" одновременно несколько поверхностных молекул. Специальные приемы, не совместимые с жизнеспособностью клеток, позволяют пометить внутриклеточные белки и цитокины. Параметры лазеров и |