Руководство Инфекционные болезни Главные редакторы акад. Ран н. Д. Ющук, акад. Раен ю. Я. Венгеров
жүктеу/скачать 31,6 Mb. Pdf көрінісі
|
ющук
- Бұл бет үшін навигация:
- Опосредованная транскрипцией амплификация рРНК
| молекулярная гибридизация,
методически основанная на способности двухцепочечной ДНК при повышенной температуре (90 °С) в щелочной среде денатурировать, т.е. расплетаться на две нити, а при понижении температуры на 10 °С вновь восстанавливать исходную двухцепочечную структуру. Для проведения молекулярной гибридизации иссде- дуемую ДНК расплетают указанным выше способом, одну нить фиксируют на специальном фильтре, который затем помещают в раствор, содержащий радио активный зонд. Зондом называется одноцепочечная молекула нуклеиновой кислоты опреде ленного вида микроорганизма, меченная радиоактивными нуклидами, с которой сравнивают исследуемую ДНК. Когда создаются условия для восстановления двух цепочечной структуры ДНК, зонд в случае наличия комплементарности между ним и исследуемой ДНК способствует образованию двойной спирали. Это позво ляет выявить степень соответствия ДНК определяемого микроорганизма струк туре зонда, что позволяет точно идентифицировать возбудителя инфекционного заболевания. Принцип риботипирования основан на том, что последовательность нукле отидных оснований в оперонах, кодирующих рибосомальную РНК (рРНК), отличается консервативностью, присущей каждому виду бактерий. Эти опероны представлены в бактериальной хромосоме в нескольких копиях. Количество и локализация копий оперонов рРНК варьируют в ДНК различных видов бактерий. Это свойство позволяет производить исследование выделенных штаммов на число копий оперонов и определять их вид. В настоящее время риботипирование прово дится в автоматическом режиме в специальных приборах. Опосредованная транскрипцией амплификация рРНК используется для диагностики смешанных инфекций. На первом этапе проводится амплифика ция (накопление) рРНК на матрице, выделенной из исследуемого материала ДНК при помощи ДНК-зависимой РНК-полимеразы. Далее проводится гибри дизация накопленного пула рРНК с видоспецифическим олигонуклеотидами, меченными флюорохромом или ферментами. Исследование проводится в нескольких пробах соответственно тем видам микробов, наличие которых предполагается в составе биологического материала от больного. На заклю ЛАБОРАТОРНЫЕ М ЕТОДЫ 8 3 чительном этапе определяются продукты гибридизации методами иммуноф люоресценции или ИФА. Реакция осуществляется в автоматическом режиме в установках, которые позволяют проводить одномоментное определение рРНК различных видов бактерий. жүктеу/скачать 31,6 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|