Патогенные стафилококки
При определении патогенных стафилококков
жүктеу/скачать 0,52 Mb.
|
Микробиология
| При определении патогенных стафилококков учитывают следующие биохимических свойств:
- определяют ДНК-азную активность (выявление фермента ДНК-азы); - реакция плазмокоагуляции (обнаружение фермента коагулазы); - продуцирование сероводорода - H2S; - продуцирование аммиака; - ферментация маннита; - обладать потенциальной гемолитической активностью. Определение продуцирования стафилококками фермента ДНК-азы. С этой целью применяют следующие компоненты: щелочной МПА (рН 8,4—8,6), раствор натриевой соли ДНК (в стерильной дистиллированной воде — 20 мг/1 мл воды) с добавлением нескольких капель 2 %-ного NaOH, хлористый кальций, 1 н. раствор соляной кислоты. Методика определения ДНК-азной активности следующая: к расплавленному охлажденному агару добавляют раствор натриевой соли ДНК (1—1,5 мг/мл), стерилизуют в водяной бане кипячением 30—40 минут. После охлаждения среды до 60°С к ней асептично добавляют хлористый кальций (0,8 мг/мл), разливают в чашки Петри по 10—15 мл. Когда агар застынет (уплотнится), его подсушивают в термостате, затем засевают на поверхность МПА легким прикосновением петли испытуемую культуру стафилококка, помещают в термостат на 18—20 часа (+37 °С). Получив рост колоний, в чашку вносят 4—5 мл соляной кислоты, которую сливают через 2—3 минут. Чашки просматривают, учитывают результат: просветленная зона вокруг колонии на мутном фоне среды свидетельствует о продуцировании ДНК-азы. Суть реакции в том, что ДНК под действием НСl выпадает в осадок. Продуцируемый патогенными стафилококками фермент ДНК-аза деполимеризует ДНК, и образование осадка не происходит. Для обнаружения коагулазы (плазмокоагулазы) берут 8 мл крови из сердца кролика иглой, надетой на шприц, промытый 5 %-ным раствором лимоннокислого натрия. Содержимое шприца сливают в пробирку с 2 мл 5 %-ного раствора лимоннокислого натрия, осторожно перемешивают. Кролику подкожно вводят 8 мл стерильного физраствора. Пробирки с кровью выдерживают при 4°С для отстоя эритроцитов или цитратную кровь центрифугируют при 1500— 2000 об/мин. Надосадочная жидкость — плазма (срок годности при хранении в холодильнике 4—5 дней). Плазму разводят физраствором 1:5, разливают в пробирки по 0,5 мл, добавляют по 0,5 мл бульонной культуры стафилококка, встряхивают. Если культура выращена на плотных средах, плазму следует развести 1:10, разлить по пробиркам по 1 мл и в нее внести 1 каплю агаровой культуры. Пробирки встряхивают, ставят в термостат при +37 °С. Учитывают через 1, 2, 3 и 24 часа. Положительным результатом будет считаться образование желеобразного или плотного сгустка, что свидетельствует о продуцировании патогенным стафилококком фермента плазмокоагулазы, фактор патогенности у стафилококков. Для дифференциации патогенных и непатогенных стафилококков используют специальную селективную среду. Тест основан на бактериостатическом действии кристаллвиолета: к 1 л 3,5 %-ного МПА добавляют 3,3 мл 0,1 %-ного кристаллвиолета и сразу разливают асептично в чашки Петри или в пробирки (скошенный агар). Растет патогенный стафилококк, колонии его фиолетового или оранжевого цвета. Непатогенные стафилококки не растут. Скрытую (потенциальную) гемолитическую способность стафилококков выявляют на 5%-ном кровяном МПА. Для этого бактериологической петлей по диаметру чашки делают прямой полоской посев бета-гемолитического штамма стафилококка. Затем перпендикулярно этой полоске с двух сторон засевают по 4-5 испытуемых штаммов стафилококков. После суточного инкубирования некоторые негемолитические штаммы в непосредственной близости к высеянному бета-гемолитическому штамму стафилококка образуют зону четко выраженного гемолиза. Для полной характеристики патогенных штаммов также определяют у них способность выделять экзотоксины. жүктеу/скачать 0,52 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|