2. Изучить особенности возбудителя псевдомоноза осетров, выращиваемых в узв

жүктеу/скачать 22,07 Kb. Дата 05.03.2023 өлшемі 22,07 Kb. #171132

Актуальность проблемы. Индустриальное осетроводство с применением установок замкнутого водоснабжения (УЗВ) – одно их наиболее перспективных направлений рыбоводства в современных условиях техногенного сокращения естественного ареала обитания осетровых рыб. Повышенный спрос на ценную продукцию осетроводства (пищевая черная икра и товарная осетрина) и полный запрет на рыболовный промысел в Урало-Каспийском бассейне (почти все виды семейства внесены в Красную книгу), порождает развитие альтернативных методов разведения рыб, таких как воспроизводство рыб семейства осетровых (Acipenseriformes) в УЗВ. Активно ведутся научно-исследовательские работы по разработке методик выращивания рыб в искусственных условиях, которые ориентированы, во-первых на сохранение и восполнение популяции ценных пород рыб в естественных условиях, и во-вторых эффективное ведение товарного осетроводства.Данный метод выращивания осетров считается наиболее эффективным способом выращивания ценных пород рыб, позволяющий вести тщательный контроль за рационом, условием содержания (уровни кислорода, нитратов и нитритов в воде, скорость ее обновления и фильтрации) и др., способный увеличить прирост гидробионтов и повысить качественные и количественные показатели продукции (с 1м2 бассейнов до 100 кг товарной рыбы). Цель и задачи исследований. Целью работы является изучение этиологии, патогенеза, патоморфологии, разработка эффективного способа лечения и усовершенствование методов профилактики псевдомоноза осетровых, выращиваемых в условиях УВЗ, для достижения которой необходимо решить следующие задачи: 1. Выявить определяющие факторы, способствующие возникновению псевдомоноза осетровых рыб; 2. Изучить особенности возбудителя псевдомоноза осетров, выращиваемых в УЗВ; 3. Изучить клинические проявления, патологоанатомические изменения и гистологическую структуру органов и тканей осетров при псевдомонозе; 4. Разработать способ лечения и усовершенствовать профилактику, а также выявить возможные осложнения псевдомоноза у осетров в условиях УЗВ. Научная новизна. 1. Установлена сезонная динамика заболеваемости рыб псевдомонозом в условиях УЗВ, выявлены основные факторы, способствующие возникновению данной патологии. 2. Изучены особенности возбудителя, проведена дифференциация инфекционного начала, установлены основные участки УЗВ, служащих резервуаром для накопления условно-патогенной микрофлоры. 3. Впервые изучена гистологическая структура органов и тканей осетровых рыб, наиболее предрасположенных к поражению при псевдомонозе, на основании которых обоснован механизм развития патологического процесса. Поэтапно описан процесс тромбоцитопоэза у осетров в норме и при патологии. 4. Даны научно-практические и экономические обоснования применения антибиотика Нитокс-200 при лечении осетров, больных псевдомонозом, определены наиболее оптимальные дозы для борьбы с инфекцией, а для профилактики болезни обоснован метод комплексного озонирования и ультрафиолетовой обработки при обеззараживании оборотной воды. Материалы и методы исследований Сформированные ремонтные и маточные поголовья осетровых рыб, в числе которых белуга (Huso huso (L.)), русский (ленский) осетр (Acipenser guldenstadtii), сибирский осетр (Acipenser baerii), севрюга (Acipenser stellatus Pallas), стерлядь (Acipenser ruthenus L.), шип, а также их гибриды: стербел, бестер и т.д., выращиваемые в условиях установок замкнутого водоснабжения, послужили объектами исследований.Определение нозологического профиля болезней осетровых и изучение закономерности возникновения псевдомоноза в УЗВ.При определении нозологического профиля болезней в осетроводческих хозяйствах использованы методы ретроспективного анализа, клиникоэпизоотологического обследования и лабораторного исследования. Ретроспективный анализ заболеваемости болезнями различной этиологии проводился по данным учетной документации путем группировки зарегистрированных случаев болезни осетров в условиях УЗВ в хронологическом порядке. Физиологическое состояние оценивали с помощью клинического осмотра рыб, при котором учитывались основные показателей (изменения в поведении рыб, снижение аппетита и дальнейшее прекращение питания, сверхнормативный отход), а также проявление клинических признаков, к примеру, образование язвенных поражении на различных участках тела, воспаление ануса, пучеглазие при псевдомонозе.Для установления закономерностей и сезонной динамики возникновения псевдомоноза в условиях УЗВ произведен учет за регулировкой температуры воды при создании искусственной зимовки для получения икры путем прижизненного сцеживания. Для оценки интенсивности эпизоотического процесса ежемесячно проводился анализ заболеваемости и летальности при псевдомонозе. 2.1.2 Методика изучения естественной микрофлоры среды обитания Комплекс бактериологических исследований по изучению микробной обсемененности с целью выявления резервуаров для накопления патогенных бактерий в различных участках УЗВ произведено общепринятыми методами с дальнейшей идентификацией микроорганизмов, с целью выявления возбудителя инфекционной патологии. Материалом исследований послужили смывы, взятые со всех компонентов системы: со стен посадочных и карантинных бассейнов, отстойников для сбора продуктов первичной механической фильтрации оборотной воды, с поверхностей плавающих нагрузок биофильтров, аэраторных «флейт» стерильными ватными тампонами, смоченными в физиологическом растворе (транспортная среда). После центрифугирования проб при обороте 3000 об/мин сливается надосадочная жидкость, далее тщательно перемешанный исходный материал используют для посева на питательные среды: на МПА, среду Эндо, среду Сабуро – для определения общего микробного числа, выделения бактерий группы кишечной палочки, а также установления наличия дрожжей и плесневых грибов соответственно. Для определения количества микробов в 1 мл исследуемого объекта использовании метод подсчета КОЕ путем умножения числа выросших в чашке колоний после инкубации в термостате в течение времени, необходимой для роста каждого из видов бактерий, на степень разведения пробы и вычисляют среднее арифметическое количество колоний, подсчитанных на двух чашках 2.1.3 Бактериологическая идентификация возбудителя при постановке диагноза Для бактериологического исследования по идентификации и дальнейшей типизации возбудителя берутся смывы со всех участков установки замкнутого водоснабжения. Кроме того для этой цели происследованы патологические материалы, взятые из вскрытых осетров, павших от инфекционной патологии. Высевы произвели из асцитной жидкости, сердца, печени, селезенки, содержимого из полости раны (отдельно из каждой пробы) на скошенный МПА, которых инкубировали в термостате при температуре 25°С в течение 48 часов.Изучение возбудителя проведено согласно схеме Кауэн и Стил, которые в качестве исходного пункта идентификации бактерии предлагают начать с определения формы микробной клетки, далее устанавливают ее морфологические и тинкториальные признаки кислотоустойчивость, способность образовать спору и капсулу путем микроскопии фиксированных и окрашенных препаратов, а также подвижность – живых неокрашенных микроорганизмов в раздавленной капле. Для определения родовой и межродовой дифференциации бактерий изучены биохимические свойства бактерии согласно инструкции по применению набора реагентов № 2 «Система индикаторная бумажная для идентификации микроорганизмов». Ключ к определению вида, подвида и типа возбудителя находят путем сопоставления полученного результата с таблицами, представленными в сборнике инструкции по борьбе с болезнями рыб, с соответствующими характеристиками бактерии.Биологическую пробу ставили на клинически здоровых рыбах тех же вида и возраста, от которых выделена культура возбудителя. Для этого осетрам внутримышечно в дозе 0,5 мл инъецирована двухсуточная бульонная культура. Кроме того, одновременно поставили отрицательный контроль путем введения рыбам стерильного МПБ в вышеуказанной дозировке. При появлении симптомов заболевания или гибели искусственно зараженных рыб проводят повторное бактериологическое исследование и только при повторном выявлении культуры с характерной, для возбудителя болезни, свойствами у подопытных рыб лабораторный диагноз считает установленным. 2.1.4 Определение чувствительности возбудителя к антибиотикам in vitro Целью исследований является выбор наиболее эффективного средства для борьбы с псевдомонозом осетров, выращиваемых в условиях УЗВ. Для определения чувствительности бактерии к антибиотикам использовали дискодиффузионный метод, суть которого заключается на формировании зон подавления роста микроорганизмов вокруг дисков с антибиотиками. Для этого бактериальную суспензию из культуры возбудителя, изолированных от больных псевдомонозом рыб, наносят на поверхность питательной среды АГВ, затем легким нажатием помещают диски, содержащие антибиотики по предварительно отмеренным сегментам на дне чашки. Результат учитывают путем измерения диаметра образовавшейся вокруг диска с антибиотиком зоны в миллиметрах после инкубации чашек Петри в термостате при температуре 37°С в течение 24 часов. Интерпретируют полученные результаты исследований следующим образом: если вокруг диска отсутствует зона подавления роста микробов то, это указывает на нечувствительность возбудителя; наличие зон диаметром до 10 мм свидетельствует о малой чувствительности культуры; диаметр зоны задержки роста бактерии более 10 мм – испытуемая культура чувствительна к данной группе антибиотика и концентрации. Следовательно, чем больше зона задержки роста культуры, тем выше ее чувствительность к испытуемому противомикробному препарату. 2.1.5 Методика проведения гистологических исследований Для гистологических исследований сразу после вскрытия, павших от псевдомоноза осетровых рыб, взяты поврежденные псевдомонозными поражениями участки кожи с прилегающей мышцей на границе со здоровой тканью, жаберные лепестки, кусочки паренхиматозных органов с признаками патологии (печень, почки, селезенки), желудочно-кишечного тракта. Взятый патологический материал фиксировали в 10%-м растворе нейтрального формалина, а обезвоживание производили в этиловом спирте возрастающей плотности. Материал уплотняли путем заливки в парафин. Гистологические срезы толщиной 8-10 мкм изготавливали на роторном микротоме Ротмик-5М и окрашивали гематоксилином и эозином. Гистологические срезы изучали при помощи тринокулярного микроскопа МС-300 (Австрия), с фотонасадкой фотографировали с помощью программы визуализации BioVision. Параметры морфометрии органов, тканей и клеток оценивали при помощи микроскопа Carl Zeiss Iena (Германия) с окулярным винтовым микрометром МОВ-1-15х [1]. 2.1.6 Методика определения лечебной эффективности антибиотиков Предварительно для выявления наиболее эффективных антибактериальных средств проведено сравнительный анализ чувствительности возбудителя к антибиотикам. Выбор антибиотиков производили с учетом действия на грамотрицательные бактерий, способа применения и времени действии. Опыты проводятся в 4 карантинных бассейнах объемом 30м3 каждый. Для постановки эксперимента в опытные и контрольные группы должен быть отобран по 10 экз. (не менее) рыб больных псевдомонозом на различных стадиях болезни (начальная, язвенная).При оценке результатов лечения учитывается изменения клинического состояния гидробионтов, сроки полного выздоровления, наличие или отсутствие падежа осетровых рыб. Эффективность лечения оценивали как отношение между выздоровевшими (у которых на 7 сутки исследований отсутствовали признаки заболеваний) и заболевшими животными, выраженное в процентах 2.6.1 Терапевтическое обоснование применения нового способа лечения После сравнительного анализа чувствительности возбудителя псевдомоноза к антибиотикам in vitro и установления фактической чувствительности из числа испытанных противомикробных средств наиболее эффективный был признан окситетрациклин, следовательно, для испытания выбран препарат Нитокс-200, основным действующим веществом которого является данное соединение. Однако этот препарат ранее не применялся в ихтиопатологии. А также не были известны границы терапевтических доз препарата в лечении бактериоза осетровых и не определена степеньбезвредности препарата и побочного действия для организма рыб. Нитокс-200 – антибиотик широкого действия, представляющую группутетрациклинового ряда. Прозрачный раствор с незначительно вязкой консистенции, коричневатого цвета, со специфичным запахом. В 1 мл растворасодержится 200 мг окситетрациклина дигидрата, который оказываетбактериостатический эффект, а комплекс окситетрациклина с магниемобуславливает его пролонгированное действие. К препарату чувствительныбольшинство грамположительных и грамотрицательных бактерий, в т.ч. стрептококки, стафилококки, фузобактерий, сальмонеллы, а также псевдомонады. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Полный запрет на отлов в ряде крупнейших стран-производителейпродуктов осетроводства, в виду угрозы исчезновения популяции осетровых, способствовало к популяризации альтернативных способов выращивания рыб данного семейства в искусственных условиях, таких как установки замкнутого водоснабжения (УЗВ), который позволяет решить один из вопросов продовольственной безопасности, поставляя на рынок экологически чистую продукцию. В этих условиях благодаря тщательному контролю условий выращивания, рациона, а также регулированию температуры водной среды можно увеличить прирост гидробионтов, а также сокращать сроки восстановления рыб после прижизненного получения черной икры, тем самым увеличить объемы производства ценной продукции [62, 65].Однако, как показывает практика даже в такой хорошо контролируемой среде обитания, как УЗВ не всегда удается избежать возникновения и распространения болезней среди осетровых рыб различной этиологии. Проведенным нами эпизоотологическим мониторингом определен нозологический профиль болезней осетров, среди которых значительная доля из числа регистрируемых в условиях УЗВ принадлежит патологиям инфекционного характера. Среди бактериозов осетровых наиболее часто встречаемым является псевдомоноз, случаи вспышки которого и падежа рыб от генерализованной формы болезни регистрируется в осетроводческих хозяйствах в течение года [56]. Наносимый псевдомонозом рыбоводческим предприятиям экономический ущерб от снижения продуктивности (недополучение объемов осетрины и черной икры), порчи товарного вида рыб, а также падежа достигает колоссальных размеров. Многочисленные дорогостоящие методы лечения, не дающие конкретных результатов тоже является препятствием на пути развития хозяйств профилирующих в данной отрасли. Анализ отечественных и зарубежных литературных данных ограничиваются знаниями об инфекционном начале, клинических признаках псевдомоноза. Недостаточно изученными сторонами псевдомоноза являются этиология возникновения болезни среди осетров, особенности возбудителей в условиях УЗВ, патоморфологические изменения, а также требующая конкретного подхода к выбору эффективных средств лечения и профилактики. жүктеу/скачать 22,07 Kb. Достарыңызбен бөлісу: