1.Суспензия культурасын алу және субкультурация. Суспензия культуралары борпылдақ каллустық тіннен алынады, оны каллустық құрамдағы сұйық қоректік ортаға салып, шайқалатын орында өсіреді (100-120 айн / мин). Аз агрегатка оңай ыдырайтын, өміршең, қарқынды түрде дамитын каллус культурасын қолдану ұсынылады.
Суспензия культуралары мыналардан тұрады:
жеке жасушалар;
жасуша топтары (2-10 жасуша);
көп жасушалы агрегаттар (жүздеген және мыңдаған жасушалар).
Суспензия культуралар типтері (жинақтау дәрежесіне байланысты)
-нашар жинақталған; (бір клеткадан (40%) және кішігірім агрегаттардан (60%) тұрады, агрегаттарда 10-12 жасушадан аспауы керек)
-орташа жинақталған;(бір клеткадан тұрады (40%), ұсақ агрегаттардан (40%) және ірі агрегаттар (20%)
жоғары жинақталған; (шағын (40%) және үлкен агрегаттардан тұрады (60%)
Инокулят (егу) - жасушалардың суспензиясы, ол жасушаларды өсірудің бастапқы нүктесі болып табылады және қоректік ортаға егу үшін қолданылады.
Жасушаның көбеюін қамтамасыз ететін инокуляттың максималды мөлшері (суспензия жасушаның критикалық концентрациясы) суспензияның жалпы көлемінің 10-20% құрайды. Инокуляттың жоғарылауы оттегінің жетіспеушілігі және қоршаған ортаға улы метаболикалық өнімдердің жиналуынан жасуша популяциясының тұншығуына әкеледі.Ол алынған өсімдік түріне, ортаның құрамына, тербелетін орынның айналу жылдамдығына байланысты алғашқы суспензия өсу циклінің ұзақтығы әдетте 15-20 күнге тең болады. Осы уақыт ішінде жасушалардың бір бөлігі өледі, каллустың бөлінуі және тірі жасушалардың қарқынды бөлінуі орын алады. Кейінгі циклдар 2 аптаға дейін қысқарады. Суспензияны колбаның қабырғаларында тірі жасуша тобы пайда болғаннан кейін трансплантациялау керек.
Жұмыс барысы: Жұмыс асептикалық жағдайда жүзеге асырылады. Алғашқы каллус ұлпа суспензиясын МС сұйық ортаға суытылған қалақпен ауыстыру керек, 50-100 мл ортаға 3-5 г ұлпа. Тек қана жас, белсенді өсіп келе жатқан, ашық түсті каллусты пайдалану керек. Суспензия көлемі колба көлемінің 10-20% құрайды (мысалы, көлемі 500 мл колбаға 50-100 мл орта құйылады).
Каллусты салғаннан кейін колбаны фольга қақпағымен, ал үстіне целлофанмен немесе қағазбен жабыңыз. Белгісін қойып, температурасы 24,5 ºС болатын термостатта қозғалу жылдамдығы 120 айн / мин айналатын качалкаға салыңыз. Егер алғашқы бірнеше күн ішінде орта бұлыңғыр болса, бұл егу уақытындағы бактериялық инфекцияның белгісі.
Достарыңызбен бөлісу: |
