Гель-хроматография.
Гели были впервые применены для разделения жидких смесей Поратом и Флодином в 1959 г. В гель-хроматографии подвижной и неподвижной фазами служит одна и та же жидкость, т. е. растворитель. Часть жидкости, протекающая вдоль зерен геля (твердого носителя), выполняет роль подвижной фазы и переносит компоненты смеси вдоль колонки.
Но другая часть жидкости проникает в поры зерен геля и играет роль неподвижной фазы.
Разделение смеси веществ происходит вследствие того, что размеры молекул этих веществ различны и зерна геля с порами определенного диаметра пропускают только молекулы, диаметр которых меньше.
При пропускании анализируемой смеси более мелкие молекулы проникают в поры и поэтому движутся вдоль зерен геля медленнее, чем крупные молекулы, не проникающие в поры.
Гель-хроматография дает возможность разделять смеси в зависимости от размера и молекулярной массы молекул веществ (ситовый анализ).
Если затем промывать слой геля чистым растворителем, то крупные молекулы движутся по колонке со скоростью этого растворителя, а мелкие молекулы вымываются из пор геля позже.
Таким образом, компоненты вымываются из колонки в порядке уменьшения их молекулярной массы (конечно, имеют значение и другие факторы).
Гель-хроматография – сравнительно простой и быстрый метод разделения смесей вещества. Он выполняется не только в колоночном, но и в тонкослойном вариантах.
В гель-хроматографии используют колонки диаметром не меньше 8-10 м (в отличие от капиллярной жидкостной хроматографии).
Главное применение гель-хроматографии – это разделение смесей высокомолекулярных соединений, но она может использоваться и для разделения смесей низкомолекулярных соединений.
Осадочная хроматография основана на различной растворимости осадков, образуемых компонентами анализируемой смеси при соприкосновении с реактивами, нанесенными на носитель.
Колонки, применяемые в осадочной хроматографии, состоят из инертного носителя и реактива-осадителя.
Приготовляют хроматографическую колонку либо механическим растиранием носителя с осадителем, либо пропитыванием носителя раствором осадителя с последующим высушиванием или без него.
Реактив-осадитель с компонентами анализируемой смеси образует осадки, которые из-за различной растворимости располагаются в определенной последовательности по высоте колонки.
Получение осадочных хроматограмм не вызывает особых затруднений. Например, смешивают Al2O3(инертный носитель) с KI (осадитель) в соотношении по массе 9:1. Наполняют смесью стеклянную трубку и медленно пропускают через нее раствор, содержащий нитраты ртути(II) и свинца(II). По мере фильтрования катионы Hg(II) и Pb(II) взаимодействуют с KI, образуют окрашенные малорастворимые осадки. При этом хуже растворяющийся HgI2 задерживается в верхней части колонки, PbI2 продвигается в нижнюю ее часть. Осадочная хроматограмма имеет вид: в верхней части хорошо заметна оранжево-красная зона HgI2, а ниже – желтая PbI2.
Осадочную хроматографию используют для разделения электролитов, разделения неорганических веществ, выделения некоторых соединений в чистом виде. Осадочная хроматография обладает рядом преимуществ: каждая зона представляет собой осадок только одного компонента, а не их смеси; границы между зонами выражены достаточно четко; иногда зоны осадков бывают разделены зонами чистого носителя, что свидетельствует о полноте разделения компонентов и облегчает их количественное определение.
Сорбционные методы, лежащие в основе хроматографического анализа, используют для прижизненного удаления токсических веществ из биологических жидкостей. С этой целью через слой сорбента пропускают кровь, плазу, лимфу. Соответственно эти процессы называю гемо-, плазмо- , лимфоперфузией (сорбцией).
Гемосорбция была первым методом, использованным для лечения отравлений. Для этого цельную кровь, взятую из артериальной системы организма, пропускают через колонку с адсорбентом, после чего вновь возвращают в организм.
Интенсивность процесса очистки крови от токсических веществ характеризуется клиренсом (объем крови, полностью очищаемый от вещества в данном аппарате за единицу времени при заданной объемной скорости крови).Недостатком гемосорбции является прямой контакт адсорбента с клеточными частицами крови (эритроцитами, тромбоцитами, лейкоцитами), в результате чего адсорбенты (активные угли) могут вызвать травму клеток. Поэтому, в настоящее время через сорбент пропускают не цельную кровь, а бесклеточную среду – плазму.
Достарыңызбен бөлісу: |