Белоктың массалық үлесін Лоури әдісімен

Белоктың массалық үлесін Лоури әдісімен
анықтау
Фолин реактивінің белоктар құрамына кіретін кейбір
амин қышқылдарының фенолдық радикалдарымен
реакциясына негізделген. Оның нәтижесінде белок
ерітіндісіне көк түс беретін қосылыс түзіледі. Боялудың
қарқындылығы
зерттелетін
объектідегі
белоктың
массалық үлесіне тәуелді болады.
Лоури әдісінің
сезімталдығы жоғары және белокты оның ерітіндідегі
концентрациясы 10-нан 100
мкг-ға дейін болғанда
анықтауға мүмкіндік береді.

Лоури әдісі
Бұл әдіс, биурет әдісі сияқты, бөлінетін
мыс иондарының пептидтік байланыстардың
химиялық топтары бар түрлі-түсті кешен түзуге
қабілеттілігіне негізделген.
Фолин-Шокалту реагентін (қышқыл фосфор-
молибден-фосфорлы
вольфрам
реагенті)
қолдану
реагенттің
хош
иісті
аминқышқылдарының
қалдықтарымен
әрекеттесуіне
байланысты
әдістің
сезімталдығын арттыруға мүмкіндік берді.
Мыс-сульфат пен сілтінің қатысуымен Фолин-
Циокалту реагенті бар ақуыздар көк түсті
қосылыс береді. Әдіс жоғары сезімталдықпен
сипатталады (сынамада 10-100 мкг белок).
Ақуыздар үлгісі
Мыс сілті ерітіндісі
10 
мин
Фолин-Кийокальт
реагентін қосу
40 
мин
Фотометрия 660 нм

Белоктардың молекулалық массасы (logMr) логарифмінің
элюсатор көлеміне тәуелділігі (Vе): 1-көк декстран; 2 ірі қара
альбумині; 3-пероксидаза; 4-трипсин; 5-лизоцим

Брэдворд әдісі Coumassie бояғышының (Coomassie Brilliant Blue G-250) 
аргинин және гидрофобты амин қышқылдарының қалдықтарымен
реакциясына негізделген. Байланыстырылған пішін максималды сіңуімен
595 нм болатын көк түске ие. Осылайша, 595 нм толқын ұзындығында
ерітіндінің сіңуі ұлғаюы ерітіндідегі ақуыз мөлшеріне пропорционал.
Бұл әдіс 2 мкг / мл-ден 120 мкг / мл диапазонында ақуыз
концентрациясының жақсы мәнін береді (осы шектерде сіңірілудің
жоғарылауының концентрацияға сызықтық тәуелділігі байқалады, жалпы
алғанда, әдістің сезімталдығы анықталған ақуыз мен бояудың
концентрациясының арақатынасына байланысты: бояу неғұрлым көп болса, 
соғұрлым сезімтал әдіс.