1. Саузерн блоттинг ДНҚ-наң рестриктазалармен кіші фрагментеге кесілуінен басталлоды. осынаң нәтижесінде ұзындығы бойынша әр түрлі рестриктер немсе ДНҚ үзінділері алынады.
2. ДНҚ фрагментеі агарозды гельь-электрофорез комегімен ажыратылады. мұнаң нәтижесінде олар агарозалық гольде ұзындығына сәйкес тара лады: үзінді қысқа болған сайын, ол электр өрісінің әсерінен агарозалық гольде жил дам қозғаллоды. Осындай гелььді бром этидиімен бояп, онаң суреті бойынша рестрикттердің ұзындығын анақтайды. Бірақ хромосомалык ДНҚ-на рестрикциялык ферментгерімен өңдеу нэтижесінде пайда болатын фрагменте сана өте коп болады да, форезді іске асыру мен гельді бояу нәтижесінде накты жолақтарды ажырату мүмкін емс. Өңделген ДНҚ гельде созыңқы жагынды болып көрінеді. Саузерн блот керекті спецификалық фрагментеді анақгау үшін қолданаллоды.
Саузерн-блоттинг әдісінің жүргізілуі.
3. Электрофорезден кейін гель ДНҚ-на денатурациялау мақсатында сілтімен өңделеді; келешекте ДНҚ фрагментеі нейлонды немсе нитроцеллюлозды мембранного блоттинг әдісінің комегімен тасымалданады. ДНҚ-на денатурациялау арқылы жалғыз тізбекті үзінділер алып, оларды нитроцеллюлозалы сузгіге ауыстыру басталлоды.Ол үшін электрофорез аяқтала салысымен агарозалық гелььді тұздың қанақтырылған ерітіндісіне батырып, сүзгі қағаздың үстіне орналастырады. Гельді нитроцеллюлоза мен жабады, ал олардың үстіне бірнеше құрғақ сүзгі қағаздарын салып престейді. Тұз ерітіндісі құрғақ сүзгі қағазына сіңеді, ол үшін ерітінді гольден, она соң нитроцеллюлозалы сүзгіден өтуі керек. Гельдегі ДНҚ үзінділері ерітіндімен бірге тасымалданады, бірақ нитроцеллюлозалы сүзгіде тұтылып бекінеді. ДНҚ үзінділерінің нитроцеллюлозалы сүзгідегі орындары электрофорез пластинкасындағы орналасу тәртібіне дәлме-дәл келеді.
4. ДНҚ-на жақсы байланастыру үшін нитроцеллюлозды блот пишет қыздырылады немсе қысқа уақыт УК сәулелерінің астында ұсталлоды.
Саузерн-блоттинг әдісінің жүргізілуі
5. Келешекге блот таңбаланған зонд пен бірге инкубацияланады. Саузерн блот пен басқа коптеген әдістерде радиоактивті емс зондтар колданасы труда.
6. Блот байланаспаған зондтардан жуылады да, радиоактивті немсе хемилюминесцентті зонд қолданған жагдайда авторадиография көмегімен суретке түсіріледі. Зонд блотпен байланасқан аудандарда күміс дақтар түзіледі. Хемилюминесцентті зондтар сандық камера көмегімен де байқала аллоды. Пайда болған жолақтар санана қарап, ген көшірме санан білуге болады
