Әл-Фараби атындағы қазақ ұлттық университеті Биология және биотехнология факультеті Саузерн-Блоттинг
Кіріспе
Southern blot, Southern blotting - үлгідегі белгілі бір ДНҚ тізбегін анықтау үшін молекулалық биологияда қолданылатын әдіс. Ол агарозды гельде электрофорез арқылы бөлінген ДНҚ фрагменттерін мембраналық сүзгіге көшіруден және одан кейін онымен будандастыру арқылы олардағы ДНҚ зондынан белгілі тізбекті анықтаудан тұрады. Бұл әдіс өнертапқыш, ағылшын биологы Эдвин Саутерннің құрметіне аталған.
Электрофорез көмегімен ерітіндідегі ДНҚ молекулаларының мөлшерін білуге болады, бірақ олардағы нуклеотидтердің реттілігі туралы ештеңе айтпайды. ДНҚ будандастыруының көмегімен жолақтардың қайсысында қатаң анықталған ретті фрагмент бар екенін түсінуге болады. ДНҚ гибридизациясы екі ДНҚ тізбегі арасындағы сутектік байланыстардың түзілуіне негізделген, олардың қосылуына әкеледі [3], [7]. Біріншіден, біз іздеген реттілікке қосымша болып табылатын ДНҚ зондын синтездеуіміз керек. Әдетте бұл ұзындығы 10-1000 нуклеотидті құрайтын бір тізбекті ДНҚ молекуласы. Толықтырғыштыққа байланысты зонд қажетті реттілікпен байланысады және зондқа енгізілген флуоресцентті жапсырма немесе радиоизотоптардың арқасында нәтижелерді көруге болады.
Электрофорез көмегімен ерітіндідегі ДНҚ молекулаларының мөлшерін білуге болады, бірақ олардағы нуклеотидтердің реттілігі туралы ештеңе айтпайды. ДНҚ будандастыруының көмегімен жолақтардың қайсысында қатаң анықталған ретті фрагмент бар екенін түсінуге болады. ДНҚ гибридизациясы екі ДНҚ тізбегі арасындағы сутектік байланыстардың түзілуіне негізделген, олардың қосылуына әкеледі [3], [7]. Біріншіден, біз іздеген реттілікке қосымша болып табылатын ДНҚ зондын синтездеуіміз керек. Әдетте бұл ұзындығы 10-1000 нуклеотидті құрайтын бір тізбекті ДНҚ молекуласы. Толықтырғыштыққа байланысты зонд қажетті реттілікпен байланысады және зондқа енгізілген флуоресцентті жапсырма немесе радиоизотоптардың арқасында нәтижелерді көруге болады.