Орындаған: bg-04К (генетика 4-топ) Қабылдаған: Алтыбаева Н



бет3/8
Дата03.12.2022
өлшемі0,99 Mb.
#161036
1   2   3   4   5   6   7   8
Байланысты:
Презентация биохим (копия) (копия) (копия) (копия) (копия) (копия)

Әдіс

  • Жоғары молекулалық салмақты ДНҚ-ны кішірек фрагменттерге кесу үшін рестрикциялық эндонуклеазалармен (шектеу ферменттері) шектеу.
  • ДНҚ фрагменттері ұзындықты бөлу үшін агарозды гель электрофорезіне ұшырайды.
  • Ұзындығы 15 кб-тан асатын ДНҚ фрагменттері болса, тасымалдау алдында гель, мысалы, тұз қышқылымен өңделеді. Бұл ДНҚ фрагменттерін депуринсіздендіреді, оларды кішірек бөліктерге бөледі, бұл кейіннен мембранаға өтуді жеңілдетеді.
  • Сілтілі тасымалдау әдісі қолданылған жағдайда агарозды гель сілтілі ерітіндіге салынады, ал ДНҚ қос спиралі денатурацияланады және одан әрі будандастыру үшін теріс зарядталған ДНҚ-ның оң зарядталған мембранамен байланысуын жеңілдетеді. Сонымен бірге РНҚ қалдықтары да жойылады.

Нитроцеллюлоза (немесе нейлон) мембрана парағы агарозды гельдің үстіне немесе астына орналастырылады. Қысым тікелей гельге немесе қағаздың бірнеше қабаттары арқылы қолданылады. Сәтті тасымалдау үшін гель мен мембрана арасында тығыз байланыс қажет. Буфер капиллярлық күштердің әсерінен ылғал потенциалы жоғары аймақтан ылғал потенциалы төмен аймаққа (мембранаға) тасымалданады. Бұл жағдайда ДНҚ гельден мембранаға тасымалданады. Полианионды ДНҚ оң зарядталған мембранамен ион алмасу әрекеттесу күштерімен байланысады.

  • Нитроцеллюлоза (немесе нейлон) мембрана парағы агарозды гельдің үстіне немесе астына орналастырылады. Қысым тікелей гельге немесе қағаздың бірнеше қабаттары арқылы қолданылады. Сәтті тасымалдау үшін гель мен мембрана арасында тығыз байланыс қажет. Буфер капиллярлық күштердің әсерінен ылғал потенциалы жоғары аймақтан ылғал потенциалы төмен аймаққа (мембранаға) тасымалданады. Бұл жағдайда ДНҚ гельден мембранаға тасымалданады. Полианионды ДНҚ оң зарядталған мембранамен ион алмасу әрекеттесу күштерімен байланысады.
  • ДНҚ-ны мембранаға түпкілікті бекіту үшін соңғысы кәдімгі немесе вакуумдық пеште екі сағат бойы 80 ° C температураға дейін қыздырылады немесе ультракүлгін сәулеленумен жарықтандырылады (нейлон мембраналар жағдайында).
  • Мембранамен алдын ала анықталған ДНҚ тізбегі бар радиоактивті немесе флуоресцентті таңбаланған ДНҚ зондының гибридизациясын жүргізіңіз.
  • Гибридизациядан кейін артық ДНҚ зонды мембранадан жуылады және гибридизация үлгісі авторрадиография арқылы рентгендік пленкада бейнеленеді (радиактивті зонд жағдайында) немесе мембрананың бояуы (хромогенді бояу жағдайында) бағаланады. .


Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3   4   5   6   7   8




©engime.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет