Орындаған: bg-04К (генетика 4-топ) Қабылдаған: Алтыбаева Н


Саузерн бойынша гибридизация әдісі



бет7/8
Дата03.12.2022
өлшемі0,99 Mb.
#161036
1   2   3   4   5   6   7   8
Байланысты:
Презентация биохим (копия) (копия) (копия) (копия) (копия) (копия)

Саузерн бойынша гибридизация әдісі

  • Бұл әдісте жоғары молекулалық хромасомалық ДНҚ ны рестриказалармен бөлшектейді.Түзілген фрагменттерді агороздық гелбде электрофорез көмегімен айырады.Одан кейін 0,4 м NaOH қосып,ДНҚ ны денатурлейді.Гелге нитроцелюлозалық немесе нейлондық фильтрдің кесегңн қойып,оның үстіне фильтрвалдық қағаз қабаттарымен ауырлық қойып жабады.Капелярлық күштер әсерімен ДНҚ фрагменттері фильтрге көтеріліп,онымен байланысады.

Вакумда 80 с фильтрді қыздырған соң ДНҚ нитрцелюлазада бекиді.Филлтрде иммобтльденген ДНҚ орналасуы гельде орналасуына сәйкес келеді.Мұны реплика дейді.Одан кейін радиактивті таспалы бір тізбекті зонты бар ерітіндіге фильтірді батырады.Фильтрде бекітілген хромасомалық ДНҚ фрагменттерімен зонд комплементарлық ережеге сай гибридизацияланады.

  • Вакумда 80 с фильтрді қыздырған соң ДНҚ нитрцелюлазада бекиді.Филлтрде иммобтльденген ДНҚ орналасуы гельде орналасуына сәйкес келеді.Мұны реплика дейді.Одан кейін радиактивті таспалы бір тізбекті зонты бар ерітіндіге фильтірді батырады.Фильтрде бекітілген хромасомалық ДНҚ фрагменттерімен зонд комплементарлық ережеге сай гибридизацияланады.

Таңбалы зондпен байланысқан фрагменттерді радиографиямен анықтайды.Саузерн-блот гибридизация әдісімен геномда ДНҚ ның белгілі ретін,трансгендік организмде бөтен геннің барлығын,геннің көшірмелілігін,геннің нуклеотид ретінде өзгерістерін анықтауға болады.Мысалы,делция инверсия

Southern blotting

  • Southern blotting (ағылшын тілінен. Southern blot) — үлгідегі белгілі бір ДНҚ тізбегін анықтау үшін молекулалық биологияда қолданылатын әдіс. Ол агароздық гельдегі электрофорез арқылы бөлінген ДНҚ фрагменттерін мембраналық сүзгіге көшіруден және онымен будандастыру арқылы олардағы ДНҚ зондынан белгілі тізбекті анықтаудан тұрады. Бұл әдіс өнертапқыш, ағылшын биологы Эдвин Саутерннің құрметіне аталған.

Әдістері

  • Жоғары молекулалық салмақты ДНҚ-ны кішірек фрагменттерге кесу үшін шектеу эндонуклеазалары (шектеу ферменттері). ДНҚ фрагменттері ұзындықты бөлу үшін агарозды гель электрофорезіне ұшырайды. Ұзындығы 15 кб-тан асатын ДНҚ фрагменттері болса, тасымалдау алдында гель, мысалы, тұз қышқылымен өңделеді. Бұл ДНҚ фрагменттерін депуринсіздендіруді тудырады, оларды кішірек бөліктерге бөледі, бұл кейіннен мембранаға өтуді жеңілдетеді.


Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3   4   5   6   7   8




©engime.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет