Жоғары молекулалы ДНҚ-на ұсақ фрагментеге кису үшін эндонуклеазалардың шектеуі

1.Жоғары молекулалы ДНҚ-на ұсақ фрагментеге кису үшін эндонуклеазалардың шектеуі;

• 1.Жоғары молекулалы ДНҚ-на ұсақ фрагментеге кису үшін эндонуклеазалардың шектеуі;
• 2.ДНҚ фрагментеі ұзындығы бойынша бөліну үшін агарозды гольде электрофорез ден өтеді;
• 3. Егер ДНҚ-наң кейбір фрагментеі 15 кб-тан ұзын бокса, гелььді беру алдында, мысалы, ДНҚ депуринациясын тудыратын және мембранаға ауысуды жеңілдететін тұз қышқылымен өңдейді;
• 4.Сілтілі тасымалдау әдісі қолданалған жағдайда, агарозды гельь сілтілі ерітіндіге орналастырылады, ДНҚ қос спиралды денатураттайды және теріс зарядталған ДНҚ-на одна әрі будандастыру үшін оң зарядталған мембрана мен байланастыруды жеңілдетеді. Бұл жағдайда РНҚ қалдықтары жойылады; 

5. Нитроцеллюлоза (немсе нейлон) мембранасынаң жапырағы агарозды гелььдің үстіне немсе астаны орналастырылады. Қысым тікелей гелььге немсе бірнеше қағаз қабаттары арқылы жүзеге асырылады. Сәтті беру үшін гельь мен мембрананаң тығыз байланасы қажет. Буфер капиллярлық күштермен жоғары су аймағынан төмен су аймағына (мембрана) өтеді. Бұл жағдайда ДНҚ гольден мембранаға тасымалданады. Полианионды ДНҚ оң зарядталған мембрана мен ион алмазу әсерлерімен байланасады;

• 5. Нитроцеллюлоза (немсе нейлон) мембранасынаң жапырағы агарозды гелььдің үстіне немсе астаны орналастырылады. Қысым тікелей гелььге немсе бірнеше қағаз қабаттары арқылы жүзеге асырылады. Сәтті беру үшін гельь мен мембрананаң тығыз байланасы қажет. Буфер капиллярлық күштермен жоғары су аймағынан төмен су аймағына (мембрана) өтеді. Бұл жағдайда ДНҚ гольден мембранаға тасымалданады. Полианионды ДНҚ оң зарядталған мембрана мен ион алмазу әсерлерімен байланасады;
• 6.ДНҚ-на мембранаға түпкілікті бекіту үшін соңғысы вакуумда екі сағат ішінде 80°C температураға дейін қызады немсе ультракүлгін сәулемен жарықтандырылады (Нейлон мембрана лары жағдайында);
• 7. Мембранамен белгілі ДНҚ тізбегі бар радиоактивті (флуоресцентті) таңбаланған үлгіні будандастыру жүзеге асырылады;
• 8. Будандастырудан кейін артық сынамана мембранадан жуады және авторадиография жолымен будандастыру өнімдерін визуалдайды (радиоактивті сынама жағдайында) немсе мембрананаң түсін бағалайды (хромогенді бояуды пайдаланған жағдайда).