Сборник международной научно-практической
жүктеу/скачать 11,88 Mb. Pdf көрінісі
|
Сборник зимней школыы 2019
| Материалы и методы
Материалом для выделения гена служил сладкий картофель (cv. Xushu 29). Растения культивировались на почве при 25°С при 16-часовом освещении/8-часовом темном фотопериоде. Тотальнаую РНК выделяли из растений сладкого картофеля при помощи реагента TRIzol (Invitrogen, MA, USA), синтез кДНК проводили с использованием TopScript™ RT DryMIX (dT18) (Enzynomic, Daejeon, Корея) в соответствии с инструкцией производителя. Полноразмерную кДНК IbCBF3 анализировали онлайн BlAST на веб-сайте Информационной-справочной системы (NCBI) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Для сравнения последовательности белков использовалась программное обеспечение DNAMAN (версия 5.0) на основе аминокислотной последовательности гомологов IbCBF3 . Теоретическая молекулярная масса и изоэлектронная точка (pI) были рассчитаны с использованием инструмента ProtParam (http://web.expasy.org/protparam/). Структурная последовательность белка были проведены с помощью базы данных сохраненных доменов на веб-сайте NCBI ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ Structure/cdd/ wrpsb.cgi). Для проведения ПЦР-анализа готовили реакционную смесь объемом 50 мкл следующего состава: 25мкл KOD буфера для KOD-полимеразы, 10 мкл 2,5мМ смеси dNTP, по 1,5 мкл смеси праймеров, концентрацией 100 пмоль, 1 мкл Taq-полимеразы, 2 мкл кДНК, 9 мкл вода свободная от РНК. Температурный режим реакции приведен в таблице 1. жүктеу/скачать 11,88 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|