Алғашқы трипсинделген жасуша өсінділерін алу тәсілі.
Тауық
эмбрионын немесе жас малдардың ағзаларын (бүйрек, өкпе, тері, тимус,
тестикула) ұсақтап турап, 2-3 рет Хенкс ерітіндісімен шаяды да, колбаға
салады. Оған 35-37ºС-ге дейін жылытылған трипсиннің 0,15%-ды
ерітіндісін 1:3 қатынасында қосып, магнитті араластырғышқа қояды.
Әрбір 3-5 минут сайын ұлпалардан ажыраған жасушаларды трипсинімен
бірге центрифуга түтігіне ауыстырып, трипсиннің жасушаға әсерін
тежеу үшін тоңазытқышта ұстайды. Колбадағы кесінділерге қайта
трипсин қосады да, қайта араластырады. Осындай процедураны 3-5 рет
қайталайды.
Трипсинделген жасуша суспензияларын 1000 айн/мин. 10 минут
бойы центрифугалағаннан кейін тұнба сұйықтығын төгіп, жасуша
тұнбасын жылы қоректік ортамен араластырады да, үш қабатты дәкемен
сүзеді. Жақсылап араластырылған жасуша суспензиясының 1 мл-ін алып
Горяев камерасында санайды. Сонан соң 1 мл қоректік ортада 700
мыңнан 1 млн жасушаға дейінгі мөлшерде араластырып, матрастарға
құйып, термостатта инкубациялайды.
Достарыңызбен бөлісу: |
