На рис. 5 (левая панель) отчётливо видны пики, соответствующие клеткам с одинарным (N1) и
двойным (N2) набором хромосом. Такая картина характерна для быстроделящихся клеток. После
обработки
клеток Актиномицином D, происходит «арест» клеток в S-фазе и соответственно
снижается пик N2, а также появляются апоптотические клетки с фрагментированной ДНК.
Рис. 5. Анализ клеточного цикла методом проточной цитометрии по
флуоресценции иодида пропидия. Линия
клеток
Jurkat (T-лимфоциты мыши) до обработки (слева) и после обработки
(справа) Актиномицином D. N1 и N2 –
популяции
клеток
с одинарным и двойным набором хромосом
соответственно; популяция между пиками N1 и N2 соответствует кеткам, находящимся на стадии S-фазы; fragmented
DNA – апоптотические клетки, в которых ДНК была фрагментирована и частично отмыта в процессе приготовления
препарата
.
Флуоресцентный метод анализа апоптоза (запрограммированной смерти) по связыванию
Аннексина V.
Для
оценки колическтва живых, апоптотических и некротических (или, так называемых,
поздних апоптотических) клеток мы используем метод основанный на двойном флуоресцентном
окрашивании клеток Аннексином V-FITC и PI. Аннексин V специфично и с высокой афинностью
связывается с фосфатидилсерином, который появляется на поверхности апоптотических и
некротических клеток; PI проникает только в клетки с повреждённой мембраной. Апоптотические
клетки окрашиваются только аннексином V, поскольку они сохраняют целостность мембраны на
ранних стадиях апоптоза, в то время как некротические клетки окрашиваются и обоим реагентами
(рис. 6).
Рис. 6. Анализапоптотических клеток окрашенных коньюгатом Annexin V-
FITC и Propidium Iodine, методом проточной цитометрии. Клетки линии HL-60 инкубировали в отсутствие (слева) и в
присутствии
хлорноватистой кислоты, 500 µM, (справа) в течение суток. Annexin V/PI -/- – живые клетки; Annexin
V/PI +/- – апоптотические клетки; Annexin V/PI +/+ – некротические клетки
.
Достарыңызбен бөлісу: 
