Бутаев махмадшариф кодирович особенности микроклонального размножения граната

47 
Продолжение таблица 3.2.1. 
МС-8 
-«- 
Без мезоинозита 
НУК (1) 
ИМК (0,4) 
-«- 
-«- 
МС-9 
-«- 
по МС 
6-БАП (2) 
Глицин (2) 
-«- 
МС-10 
-«- 
-«- 
6-БАП (1) 
-«- 
-«- 
МС-11 
-«- 
Мезоинозит 
(50) 
6-БАП (2) 
Глицин (1) 
-«- 
МС-12 
1МС 
В
6 
(0,5) В
12 
(0,5) 
Мезоинозит (50) 
- 
Глицин (2) 
Аденин (1) 
Треонин (5) 
Сахароза 
(3000) 
МС-13 
1/4МС 
В
1 
(0,25) 
6-БАП(1,5) 
Аденин (1) 
-«- 
МС-14 
МС 
1/2 МС 
- 
Глицин (1) 
- 
МС-15 
1/2МС 
В
6 
(0,25) 
- 
- 
- 
МС-16 
1/2МС 
- 
- 
- 
- 
МС-17 
1/4МС 
В
1 
(5,5) В
6 
(5,5) 
6-БАП(0,1) 
Глицин (1) 
-«- 
МС-18 
1/2МС 
-«- 
-«- 
Глицин (2) 
-«- 
МС-19 
1/2МС 
В
1 
(1) 
-«- 
ИМК (0,4) 
ИУК (0,5) 
ИМК (3) 
-«- 
-«- 
МС-20 
-«- 
-«- 
ИМК (3) 
-«- 
-«- 
 
Примечание:
 НУК-нафтилуксусная кислота; ИУК-индолил уксусная 
кислота; ИМК-индолилмасляная кислота; К-кинетин; ГК-гибберелиновая 
кислота; 6-БАП- 6-бензиламинопурин. 
При подборе оптимальной питательной среды учитывался ряд 
показателей: скорость развития растений через определенный период после 
посадки; образование максимального числа побегов за минимальный срок, 
скорость ризогенеза. Нами использовались как твердые среды с содержанием 
0,7 - 0,8% агар-агара, так и жидкие с мостиком из фильтровальной бумаги, 
служащим для поддержания экспланта над поверхностью жидкости. 
Среды автоклавировали при температуре 120
0
С и давлении 1атм. в течение 
20 мин в вертикальных автоклавах. Все работы по стерилизации и плановые 
пересадки растительного материала осуществляли в ламинар – боксе. 

48 
Культивирование эксплантов проводилось в световой установке в 
культивационной комнате. Несмотря на то, что в начале роста 
in vitro
побеги 
зелёные, они растут как гетеротрофы, потребляя всё необходимое для 
жизнедеятельности из питательной среды. 
Для 
этих 
культур 
свет 
нужен 
только 
для 
определенных 
морфогенетических процессов. Мы применяли следующий режим освещения; в 
начальный период роста, т.е. в течение трёх суток экспланты культивировали 
при низкой освещенности. Затем экспланты переносились в условия с 
освещённостью 2500 – 3000 люкс.
Оптимальным фотопериодом для многих растений является 16 часов – 
день и 8 часов – ночь. Как отмечает [63], для древесных косточковых культур 
необходим короткий световой день, который благоприятно сказывается не 
только на образовании корней и побегов, но и на дальнейшем развитии 
растений 
in vitro
, которое также находится под влиянием предварительной 
короткодневной экспозиции. 
Поэтому на начальном этапе (первые пять дней выращивания) экспланты 
культивировались на 8 часовом освещении.
Обычно культуры тканей выращивают при постоянной температуре +25
0
С. 
Для культуры побегов граната и инжира оптимальной является температура 
+25
0
С в течение 2-3 недель, а затем необходимо повышение до +30
0
С для 
стимулирования образования пазушных побегов. Относительная влажность 
воздуха поддерживалась на уровне 75 – 80%. 
Число отрезков, которое может быть получено от одного исходного 
растения в год, является крайне ограниченным, т.к. в природе вегетативный 
рост является периодичным и необходимо брать отрезки не менее 10 – 12 см, 
чтобы получить из них растения. 
В культуре побега степень размножения можно увеличить за счёт 
увеличения выхода адвентивных побегов в среде, содержащей цитокинины в 
определенной концентрации. Необходимо непрерывное действие цитокининов, 
которое бы стимулировало их образование. Одиночный эксплант может 

49 
трансформироваться в массу побегов, которые можно отделить и, вновь 
помещая на среду с цитокинином, индуцировать рост новых побегов. 
Таким методом за короткий срок можно получить большое число растений 
от одного экспланта.
У некоторых растений через апикальное доминирование за счёт гормонов 
в питательной среде невозможно индуцировать пазушные почки. Степень 
размножения в таких случаях зависит от числа узловых черенков, на которые 
можно поделить культуру побега в каждом пассаже. Этот метод, конечно, 
менее продуктивен, но с каждым пассажем число новых побегов увеличивается 
и может достичь большого количества. 
В исследованиях были применены оба метода – микрочеренкование через 
культуру побега и индукция адвентивных побегов из апикальных и пазушных 
почек под действием цитокининов. В ходе экспериментов было выявлено, что 
важным фактором, влияющим на микроразмножение, является консистенция 
питательной среды (таблица 3.2.2). 

жүктеу/скачать 1,98 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: