Ферментные (биохимические) свойства. Это объясняется тем, что кишечная палочка сбраживает лактозу, содержащуюся в среде, при этом образуется молочная кислота, под действием которой происходит восстановление цвета фуксина, также входящего в состав среды, но обесцвеченного сульфитом натрия. Глюкозные и лактозные среды с индикатором Е. coli сбраживает, и среда в пробирках становится розового или красного цвета. Встречаются лактозонегативные штаммы (сероварианты) Е. coli, не сбраживающие лактозу. Многие штаммы ферментируют маннит, дульцит. Е. coli образует индол, не образует H2S, дает положительную реакцию с метиловым красным (среда окрашивается в розово-красный цвет) и отрицательную реакцию Фогеса — Проскауэра (среда окрашивается в желтый цвет). Последние две пробы ставят с двухсуточной культурой, выращенной на среде Кларка (раствор пептона, глюкозы, двухфосфорнокислого калия в дистиллированной воде). В пробирку с культурой на среде Кларка пипеткой добавляют 5 капель спиртового раствора метилового красного, пробирку встряхивают. При ферментации глюкозы происходит розовое окрашивание, при отсутствии ферментации углевода — желтое окрашивание, отрицательный результат. В другой пробирке с культурой на среде Кларка проводят пробу Фогеса — Проскауэра: добавляют 0,2 мл 40 %-ного КОН и 0,5 мл 6 %-ного спиртового раствора альфа-нафтола, учитывают результат через 3—5 минут. Если культура сбраживает глюкозу с образованием ацетилметилкарбинола, последний с индикатором дает розовое окрашивание, положительный результат. На жидкой синтетической среде Козера и плотной среде Симмонса с индикатором бромтимолблау Е. coli не растет потому, что не усваивает цитратно-аммонийные соли сред. Е. coli желатину не разжижает, мочевину не расщепляет.
Родовую дифференциацию семейства Enterobacteriaceae проводят на основе культурально-морфологических и биохимических свойств бактерий. Учитывая, что биологические свойства разных штаммов эшерихий неодинаковы, в связи с их различной вирулентностью и антигенной структурой выделенную из исследуемого материала чистую культуру подвергают серологической типизации в РА, используя набор типоспецифических агглютинирующих 0-колисывороток.