Пцр. Полимеразды тізбекті реакция. Днқ клондау әдісі. Днқ секвенирлеу әдісі. Электрофоретикалық әдіс
жүктеу/скачать 22,55 Mb.
|
Мейрманова А Биология ПЦР
- Бұл бет үшін навигация:
- 3. Полимерлеу.
- ПТР САТЫЛАРЫНЫҢ ЕРЕКШЕЛІКТЕРІ
- Тұқым қуалайтын аурулардың диагностикасында ПТР(ПЦР) қолдану Тұқым қуалайтын Тэй-Сакс ауруы
| 2. Праймерді будандастыру.
Температура 50 ° C дейін төмендейді. Бұл жағдайда ДНҚ тізбектерінің праймерлермен гибридтенуі жүреді. Бұл кезең әдетте 30 секундты алады 3. Полимерлеу. Инкубациялық қоспаны 70°С температураға дейін қыздырады. Бұл температурада Tag полимераза екі праймерді 3' ұшынан ұзартады. Праймерлер матрица өлшеміне дейін өседі. Бұл процесс 90 секундты алады. Нәтижесінде ДНҚ мөлшері екі есе артады. Tag полимераза ферменті Thermus aquaticus термофильді бактериясынан бөлініп алынған және ыстыққа төзімді. 70°С температурада праймер-ДНҚ гибриді денатурацияланбайды, ал Тег полимераза жоғары жылдамдықта жұмыс істеуге қабілетті. Күшейтудің 20 циклі үшін ДНҚ көшірмелерінің саны 106-ға жетеді. ПТР САТЫЛАРЫНЫҢ ЕРЕКШЕЛІКТЕРІ: • ПТР 3 негізгі сатыдан тұрады, 20-40 рет қайталанып отырады. Бұл цикл термоциклді аппаратта жүреді, ол оте аз уақыт ішінде қоспалық реакцияның температурасын жоғарылатады немесе төмендетеді. • Денатурация – 94°C жуық: • Денатурация кезінде ДНК-ң 2 тізбегі балқиды да бір тізбекті болып түзіледі. (барлық энзимді реакциялар тоқтайды). • Аннеалинг (күйдіру) – 54°C жуық: • Сутектік байланысы біртіндеп құралады және бір тізбекті ДНК мен жалғыз праймерлер арасы бұзылады. Егер праймер ДНҚ-ң комплементарлы аймағында орналасса, праймер матрицада қалып қояды, себебі сутектік байланыс өте күшті. • Ұзаруы (элонгация) – 72°C жуық Тұқым қуалайтын аурулардың диагностикасында ПТР(ПЦР) қолдану Тұқым қуалайтын Тэй-Сакс ауруы – гексозаминидаза-А лизосомалық ферментінің жетіспеушілігімен сипатталатын аутосомды-рецессивті ауру. Нәтижесінде ганглиозид GM2 нейрондарда жинақталады. Аурудың белгілері 5 айлық жаста біліне бастайды. 3-4 жасқа дейін дамитын аурудың терминалдық сатысында толық қозғалыссыздық, кереңдік, соқырлық, трофикалық бұзылулар, декортикация, өлім пайда болады. Жас американдық отбасында бірінші балаға (қыз) Тай-Сакс ауруы диагнозы қойылып, 4 жасында қайтыс болды. Ерлі-зайыптылардың дені сау бала болғанын қалайды. Эмбриональды кезеңде амниоцитоз арқылы аурудың молекулярлық-генетикалық диагностикасын жүргізу діни себептер бойынша бұл отбасы үшін қолайлы емес. Өйткені эмбрион қайтадан ауруды тасымалдаушы мутантты аллельдерге ие болса, ерлі-зайыптылар діни ережелерді сақтай отырып, жүктілікті тоқтата алмайды. Жоғарыда айтылғандардың бәріне қарамастан, қазіргі заманғы генетиканың жетістіктерінің арқасында одан шығу жолы табылды. Ол үшін бірінші кезеңде әйелінен бірнеше жұмыртқа алып, күйеуінің ұрығымен ұрықтандыру керек. Сегіз бластомердің даму сатысында талдау үшін әрбір преэмбрионнан бір бластомерді қауіпсіз алып тастауға болады. Сегіз жасушалы эмбрионнан бір бластомерді (клетка) бөліп алу процесінің фотосуреті көрсетілген. жүктеу/скачать 22,55 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|