Пцр. Полимеразды тізбекті реакция. Днқ клондау әдісі. Днқ секвенирлеу әдісі. Электрофоретикалық әдіс
жүктеу/скачать 22,55 Mb.
|
Мейрманова А Биология ПЦР
- Бұл бет үшін навигация:
- Миотоникалық дистрофия (MD)
- Геномная ДНК
- Электрофореграмм а ДНК
| Миотоникалық дистрофия (МД) ересек кезеңдерінде прогрессивті бұлшықет дегенерациясымен сипатталады және аутосомды-доминантты түрде тұқым қуалайды. Бұл геннің құрамында ЦТГ тринуклеотидті қайталанатын (кеңейтілген) деп аталатын аймақ бар. MD генінің қалыпты аллельдерінде CTH 5-тен 30-ға дейін, ал мутантты аллельдерде 50-ден 2000-ға дейін көшірмелер болады.
Миотоникалық дистрофия (MD) генінің барлық тізбегі қазіргі уақытта белгілі болғандықтан, MD геніндегі ДНҚ фрагментінің екі тізбегіне комплементарлы олигонуклеотидті праймерлерді синтездеуге және бұл фрагментті ПТР арқылы көбейтуге болады. 1-праймер ГАЦ тізбегін бейнелейтін төменгі (3'-5') тізбектің аймағына комплементарлы болуы керек, ал 2-праймер ЦТГ бар ДНҚ-ның жоғарғы (5'-3') тізбегінің аймағына қосымша болуы керек. Күшейтілгеннен кейін құрамында CTH қайталанатын ДНҚ фрагментінің өлшемі электрофорез арқылы анықталады. ЦТГ тринуклеотидті қайталануларының санын гельдегі маркерлер ретінде ЦТГ қайталануларының белгілі саны бар ДНҚ тізбегін қосу арқылы оңай анықтауға болады. ПТР және электрофорез әдістерін қолдану арқылы MD геніне миотоникалық дистрофия ауруын тексерудің барлық кезеңдері схемалық түрде берілген. Егер әрбір хромосомада CTG қайталануының 30-дан аз көшірмелері болса, бұл баланың, ұрықтың немесе сегіз жасушалы преэмбрионнан алынған бластомердің қалыпты MD аллелі үшін гомозиготалы екенін білдіреді немесе екі қалыпты аллель үшін гетерозиготалы. ЦТГ ГАЦ n Геномная ДНК Праймер 1 Амплификация тандемных повторов ЦТГ Определение числа повторов ЦТГ электрофорезом Электрофореграмм а ДНК Му
т ные М D аллели 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Нормал ь ные М D аллели 50 ЦТГ повторов 25 ЦТГ повторов ' 3 3 ' 5 ' 5 ' жүктеу/скачать 22,55 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|