Перевод профессионально

 

71 

Unit 10 

Biology 

1.  Read

,  translate  and  give  the  summary  of  the  text  ―Advantages  of 

Ultrarapid and High-P

ressure Freezing Methods‖. 

Advantages of Ultrarapid and High-Pressure Freezing Methods 

Ultrarapid  and  high-pressure  freezing  methods  offer  a  multitude  of 

advantages as preparation methods in cell biology. By avoiding the need 

for chemical fixation, these cryofixation techniques potentially permit the 

study of cell structure in a condition close to that existing in life. Because 

one  particular  instant  in  a  biological  process  can  be  captured,  the 

accumulation of intermediate stages, which may occur during slow death 

in aldehyde fixatives, is avoided. Living specimens can thus be frozen for 

ultrastructural  examination  at  known  intervals  after  application  of  a 

biological  stimulus.  This  has  made  it  possible  to  use  the  electron 

microscope for  studies  of  transient  biological  events  that  are  completed 

within  a  few  seconds  or  even,  in  favorable  instances,  within  a  few 

milliseconds.  The  ability  to  undertake  such  direct  kinetic  studies  was  a 

significant breakthrough in cell biology, as previously, sequences of such 

rapid  events  could  only  be  guessed  at  indirectly  from  images  of 

chemically fixed specimens. Metal block impact freezing, spray freezing, 

plunge  freezing,  and  jet  freezing  methods  have  all  been  adopted  to 

permit  time-resolved  analysis  of  rapid  events  (for  review,  see  Knoll, 

1995).  

Another  important  advantage  is  that  ultrarapid-frozen  specimens  can 

be subjected to 

deep etching

 or freeze drying, a technique in which water 

molecules are allowed to sublime from the frozen surface of a fractured 

(or, in some cases, unfractured) specimen before replication (see article 

by  Shotton).  Glycerol  cannot  be  sublimed,  but  by  directly  freezing 

specimens in dilute aqueous solutions, the outer surfaces of membranes, 

extracellular  matrix  components,  and  intracellular  cytoskeletal  elements 

 

72 

can  be  exposed  by  deep  etching  or  freeze  drying.  For  deep-etch 

observations  of  the  cytoskeleton  and  internal  membrane  surfaces  of 

cells,  a  compromise  has  to  be  made  in  order  to  obtain  clean  views 

unobscured by cytoplasmic components. Typical procedures for cultured 

cells  attached  to  a  substrate  involve  lysing  them  with  Triton  X-100  or 

physically  tearing  them  open  by  peeling  off  a  strip  of  nitrocellulose 

membrane that has been allowed to adhere to their dorsal surfaces. This 

is followed by rinsing in dilute buffer to remove cytoplasmic components, 

light  fixation  with  aldehydes,  and  then  immersion  in  10

–15%  methanol 

immediately  prior  to  freezing.  The  methanol  acts  as  a  cryoprotectant, 

increasing the depth of adequate freezing, and also has the advantage of 

being  volatile  under  vacuum  at 

–100°C,  thus  facilitating  the  etching 

process.  This  application  is  thus  quite  distinct  from  studies  aiming  to 

preserve structure in the native state, but it is a fundamentally important 

one,  as  it  provides  access  to  structural  information  that  cannot  be 

obtained by other electron microscopical methods (Heuser, 1981). Deep 

etching  has  also  been  adopted  to  study  macromolecules  absorbed  to 

microscopic mica flakes and other substances (Heuser, 1989).  

In  addition  to  freeze  fracture,  deep  etching,  and  cryoelectron 

microscopy,  other  key  routes  to  the  examination  of  ultrarapid-frozen 

specimens  are  freeze  substitution  and  cryoultramicrotomy.  Here  the 

ability 

to 

preserve 

epitopes 

is 

of 

prime 

importance 

for 

immunocytochemical  studies  (see  article  by  Roos 

et  al.

).  The 

complementary  application  of  these  approaches,  together  with  freeze-

fracture  cytochemistry  (Severs,  1995;  Fujimoto,  1997),  has  wide 

application in cell biology today.  

 

From ―Cell Biology‖ (2006), 

by Nickolas J.Severs and David M.Shotten, 

Nicholas J. Severs and David M. 

edited by Julio E. Celis.         

 

73 

2.  Match  the  terms  used  in  biology  with  their  definitions  and  find  their 

Russian equivalents. 

жүктеу/скачать 0,86 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: