Протокол №1 Дата:
1. Выделение дезоксирибонуклеопротеинов из селезенки.
Принцип метода:
Дезоксирибонуклеопротеины (ДНП) выделяют из тканей, богатых клеточными ядрами, например, из селезенки и др. ДНП хорошо растворимы в растворах солей средней концентрации (например, в 1 М р-ре хлори
да натрия) и осаждаются в виде нитей при разведении раствора до 0,15 М дистиллированной водой.
Ход работы:
В ступке растирают в течении 1 минуты 2 г селезенки с равным количеством кварцевого песка. Добавляют 5 мл охлажденного 2М раствора хлорида натрия, содержащего 0,04% трёхзамещённого цитрата натрия, тщательно растирая. Далее добавляют порциями 50 мл охлаждённого 1М раствора хлорида натрия и продолжают тщательно растирать в течение 15 минут. Полученную массу равномерно распределяют по центрифужным пробиркам. После уравновешивания пробирок центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают в мерный цилиндр, измеряют ее объем и затем медленно тонкой струей вливают в шестикратный объём дистиллированной воды. Наматывают нити ДНП на деревянную палочку. Нити ДНП с палочки переносят в пробирку с 2 мл 0,4% раствора едкого натрия.
Наблюдения:
С полученным раствором проводят две реакции:
1.1.Биуретовая реакция
Ход работы:
К 5 каплям исследуемой жидкости прибавляют 5 капель 10% р-ра едкого натра, 2 капли 1% р-ра сульфата меди и всё перемешивают. Содержимое пробирки приобретает фиолетовый цвет. Нельзя добавлять избыток сульфата меди, так как синий осадок гидрата окиси меди маскирует характерное фиолетовое окрашивание биуретового комплекса белка.
Наблюдения:
Выводы:
1.2.Реакция на дезоксирибозу ДНК с дифениламином.
Ход работы:
К 15-20 каплям 1% раствора дифениламина (растворенного в смеси уксусной и серной кислот), прибавляют равный объём исследуемого раствора. Пробирку со смесью закрывают алюминиевой фольгой и помещают в кипящую водяную баню на 15 минут. При этом ДНК гидролизуется, освободившаяся дезоксирибоза реагирует с дифениламином и даёт синее окрашивание.
Достарыңызбен бөлісу: |
