2.2.ДНҚ мөлшері мен салмақ маркерлері
ДНҚ ұзындығының маркерлері
Бағалау үшін белгілі бір мөлшердегі ДНҚ фрагменттерінен тұратын ДНҚ ұзындығының маркерлері қол жетімді
молекулалық салмағы 10 п.н. 12 кб дейін Кейбір маркерлерде 2 немесе 3 есе үлкен жолақтар болады
қалғандарымен салыстырғанда жарқын, ДНҚ фрагменттерінің мөлшерін оңай визуалды анықтау үшін.
Барлық маркерлерді бромды этидиймен, SYBR® қауіпсіз және басқа ДНҚ бояғыштарымен бояуға болады
кейбір стандарттарды T4 полинуклеотидті киназамен радиолық таңбалауға болады
немесе T4 ДНҚ-полимераза.
ДНҚ маркерлері ДНҚ ұзындығы мен мөлшерін бағалауға арналған стандарт ретінде қолданылады. Маркерді құрайтын ДНҚ фрагменттері,
электрофоретикалық гельде интеркалациялаушы заттармен: бромид этидийімен және SYBR жасыл түспен бояу арқылы визуалдау.
Біз мөлшері 24-тен 10000 а.к. дейінгі ДНҚ маркерлерінің кең спектрін ұсынамыз.
Маркерлер екі түрде болады:
Қолдану буферіндегі ДНҚ маркерлері дайын (бояғыш пен салмақ агентімен);
ДНҚ маркерлер - бұл жүктеу буферінде сұйылтуды қажет ететін концентраттар.
Соңғы жылдары молекулалық-генетикалық маркерлерді генетика, селекция, биоәртүрлілікті сақтау, эволюция механизмдерін зерттеу, хромосомаларды бейнелеу, генетика мәселелерін шешу үшін ДНҚ, РНҚ деңгейінде қолдану тиімділігі туралы көптеген мәліметтер жинақталды. сондай-ақ тұқым шаруашылығы мен асылдандыру үшін.
Кеңінен қолданылатын молекулалық-генетикалық маркерлерді шартты түрде келесі түрлерге бөлуге болады - белоктардың аминқышқылдық тізбектерін кодтайтын құрылымдық гендер аймақтарының маркерлері (белоктардың электрофоретикалық нұсқалары), құрылымдық гендердің кодталмайтын аймақтарының маркерлері және әртүрлі ДНҚ тізбектерінің маркерлері, құрылымдық гендерге қатысы әдетте белгісіз - геном бойынша қысқа қайталанулардың таралуы (RAPD - кездейсоқ күшейтілген полиморфты ДНҚ; ISSR - төңкерілген қайталанулар; AFLP - шектеу орындарындағы полиморфизм) және микроспутниктік локустар (бірлік ұзындығы 2- ден тандем қайталануы) 6 нуклеотид).
ДНҚ деңгейінде полиморфизмді анықтауға арналған заманауи технологиялардың жиынтығы бар, олардың арасында мыналарды ажыратуға болады:
Шектелген ДНҚ фрагментінің полиморфизм анализі (RFLP);
полимеразды тізбекті реакцияны қолдана отырып полиморфизмді талдау (ПТР) және геномдық ДНҚ-да қайталанатын дәйектілік арасындағы ДНҚ-ны күшейтуге негізделген басқа әдістер.
Достарыңызбен бөлісу: |