Руководство Инфекционные болезни Главные редакторы акад. Ран н. Д. Ющук, акад. Раен ю. Я. Венгеров
IIIIIIIII Термическая денатурация ДНК (30-40 с при 93-95 °С)
жүктеу/скачать 31,6 Mb. Pdf көрінісі
|
ющук
| IIIIIIIII
Термическая денатурация ДНК (30-40 с при 93-95 °С) 1 Отжиг праймеров-олигонуклеотидов, запускающих синтез ДНК щ ш ш яяш тш тт— ттт (30-40 с при 93-95 °С) Т ТТ ТТ Т Т Т Т Т Т Т Т Т Т Т Т м праймер и1........... ДЦ _______ 1 Синтез комлементарных нитей ДНК (70-72 °С) и формирование ампликона с участием микробной ДНК-полимеразы ■ 1 I I I ■ I ■ Q Q а дезоксинуклеотидтрифосфат 1111 I I I I I LI-U 1 1 H I I Завершение первого цикла амплификации ттм м м м м м Ш 1 М | М | ................. I После 30-80 циклов амплификации — проведение идентификации микроба путем ДНК-гибридизации (определение числа гибридов с помощью различных тест-систем, в том числе флюорохромных и др.) Рис. 6.14. Принцип и этапы полимеразной цепной реакции ГЛ А ВА 6 Р А З Д Е Л I 8 2 М ЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ Как правило используются наборы праймеров, соответствующие характеру инфекционного процесса. Например, для диагностики, вируса используют прай меры грамм+кокков и грамм-палочек. Определять наличие какого-либо микроорганизма в биологическом материале можно путем рестрикционного анализа. Данный метод основан на применении ферментов, носящих название рестриктаз и позволяющих распознавать микроор ганизмы определенного вида. Принцип метода заключается в том, что в геноме микробов одного вида нахо дится строго определенное (генетически детерминированное) число участков узнавания для определенной рестриктазы. В настоящее время из различных бак терий выделено и очищено более 175 различных рестриктаз, для которых извест ны сайты узнавания. Если выделенную из конкретного микроба ДНК обработать определенной рестриктазой, то это приведет к образованию строго определенного количества фрагментов ДНК фиксированного размера. Размер каждого типа фрагментов можно узнать с помощью электрофореза в агарозном геле: мелкие фрагменты перемещаются в геле быстрее, чем более круп ные фрагменты, и длина их пробега больше. Гель окрашивают бромистым этидием и фотографируют в ультрафиолетовом излучении. Сопоставляя полученную карту рестрикции ДНК с образцами видовых рестрикционных карт, можно выявить при надлежность анализируемого возбудителя к определенному виду или роду — даже такому, который находится за рамками предположений клинициста. Еще один способ генетического анализа — жүктеу/скачать 31,6 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|